目的:探究PI3Kγ在小鼠肝臟缺血再灌注損傷中的作用。方法:構(gòu)建C57BL/6J小鼠肝臟缺血再灌注模型和RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型,給予IPI549（PI3Kγ特異性抑制劑）干預(yù),Western blot檢測組織和原代細(xì)胞p110γ（PI3Kγ）蛋白水平,以ALT、HE染色、TUNEL評價肝臟損傷水平,qRT-PCR檢測RAW264.7細(xì)胞缺氧復(fù)氧過程TNF-α和p110γ的mRNA水平,Western blot檢測細(xì)胞TNF-α、JNK、p-JNK蛋白表達(dá)情況,ELISA檢測細(xì)胞上清TNF-α水平。結(jié)果:和原代肝細(xì)胞相比,枯否細(xì)胞顯著高表達(dá)p110γ（PI3Kγ）蛋白。與sham組比較,IR組肝組織中p110γ的蛋白水平降低;而使用IPI549（PI3Kγ特異性抑制劑）干預(yù)小鼠,可加重小鼠肝臟缺血再灌注后肝組織損傷和肝臟組織細(xì)胞凋亡,利用GdCl₃封閉枯否細(xì)胞,IPI549加重的肝組織損傷和細(xì)胞凋亡得到緩解。在體外實(shí)驗(yàn)中,RAW264.7細(xì)胞經(jīng)缺氧復(fù)氧處理后,細(xì)胞中p110γ的mRNA表達(dá)水平下降,IPI549干預(yù)使細(xì)胞缺氧復(fù)氧處理后,TNF-α的... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

肝臟IR模型的構(gòu)建及p110γ蛋白表達(dá)情況

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文部點(diǎn)片狀壞死灶和門管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤，肝血竇充血腫脹，部分肝細(xì)胞、排列紊亂；IPI549 + IR 組與 IR 組相比肝組織損傷更為嚴(yán)重，出現(xiàn)片狀大量炎癥細(xì)胞浸潤，肝血竇結(jié)構(gòu)界線不清，細(xì)胞廣泛空泡樣變，肝小葉較中央變性更重。使用 GdCl3尾靜脈注射封閉 KCs 后，我們發(fā)現(xiàn) GdCl3+ IR 組損傷減輕，肝細(xì)胞水腫壞死明顯減少，肝小葉中央結(jié)構(gòu)正常，有點(diǎn)；GdCl3+ IPI549 + IR 組對比 IPI594 + IR 組損傷也有了明顯減輕，炎性細(xì)少，有部分肝細(xì)胞水腫、壞死，未見片狀壞死灶(圖 2)。

圖 3 各組血清 ALT 含量（U/L）Fig.3 serum ALT level in each group（U/L）#p>0.05，**p<0.01，a:p<0.01 和 IR 組相比，b:p<0.01 和 IPI549+IR 組相比#p>0.05，**p<0.01，a:p<0.01 VS IR group，b:p<0.01 VS IPI549+IR group TUNEL 法檢測小鼠肝臟組織細(xì)胞凋亡TUNEL 法檢測肝組織細(xì)胞凋亡情況。TUNEL 結(jié)果顯示黃棕色時為陽性高倍鏡鏡檢可見凋亡細(xì)胞染色質(zhì)聚集或碎裂。IR 組可見部分肝組織細(xì)胞凋細(xì)胞多集中在門管區(qū)附近；IPI549 + IR 組可見明顯的細(xì)胞凋亡程度增高胞核固縮、碎裂；GdCl3+ IR 組較 IR 組肝細(xì)胞凋亡明顯減少，細(xì)胞核染此外 GdCl3+ IPI549 + IR 組對比 IPI594 + IR 組損傷也有了明顯減輕，凋量明顯減少。該部分實(shí)驗(yàn)證明 IPI549 預(yù)處理加重了肝 IR 過程肝組織細(xì)胞這一作用同樣可以被 GdCl3封閉 KCs 后所逆轉(zhuǎn)（圖 4）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]GdCl3 abates hepatic ischemia-reperfusion injury by inhibiting apoptosis in rats[J]. Jian-Yi Li,Xi Gu,Wen-Hai Zhang,Shi Jia and Yong Zhou Department of General Surgery,Shengjing Hospital, China Medical University,Shenyang 110004,China.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2009(05)



本文編號：3509174