本文關(guān)鍵詞：BHL DNA適配體對銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)抑制作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究BHL DNA適配體能否在體外有效干擾銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng),抑制其生物被膜形成,并干擾浮游菌綠膿菌素的生物合成。方法1體外培養(yǎng)銅綠假單胞菌,觀察高濃度BHL DNA適配體是否影響銅綠假單胞菌生長曲線。2體外干擾銅綠假單胞菌生物被膜的形成:體外構(gòu)建銅綠假單胞菌生物被膜模型,給予高濃度BHL DNA適配體進(jìn)行成膜干擾;光學(xué)顯微鏡觀察生物被膜形態(tài)學(xué)變化;結(jié)晶紫染色法定量測定生物被膜。3體外干擾銅綠假單胞菌綠膿菌素的產(chǎn)生:設(shè)計適配體組、陰性對照組和文庫對照組,培養(yǎng)48小時后采用氯仿萃取法定量測定銅綠假單胞菌綠膿菌素含量。4細(xì)胞外DNA(extracellular DNA e DNA)對BHL DNA適配體抑制銅綠假單胞菌生物被膜形成的影響:氯化鋰裂解法抽提銅綠假單胞菌基因組DNA(Genomic DNA g DNA),設(shè)計適配體組、陰性對照組、g DNA組和適配體+g DNA組,培養(yǎng)48小時后結(jié)晶紫染色法定量測定生物被膜。結(jié)果1培養(yǎng)基中含有高濃度BHL DNA適配體時,銅綠假單胞菌的生長曲線與不含適配體的高度一致,并未出現(xiàn)適配體抑制或促進(jìn)細(xì)菌增殖情況。2體外干擾銅綠假單胞菌生物被膜的形成:光學(xué)顯微鏡觀察陰性對照和文庫對照均顯示大片致密的膜狀結(jié)構(gòu)。而適配體干擾組Aptamer 1、2、16、46則顯示出了單個菌體分布或是疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。Aptamer 16干擾下的生物被膜生長幾乎被破壞,鏡下存在大量散在的單個菌體。結(jié)晶紫染色定量測定生物被膜量,陰性對照組與文庫對照組的測定值高于適配體組(P0.05),而陰性對照組與文庫對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3體外干擾銅綠假單胞菌綠膿菌素的生物合成:適配體組綠膿菌素值低于陰性對照組和文庫對照組(P0.05),而陰性對照組與文庫對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。4細(xì)胞外DNA(extracellular DNA e DNA)對BHL DNA適配體抑制銅綠假單胞菌生物被膜形成的影響:陰性對照組生物被膜定量測定高于適配體組(P0.05),但低于g DNA組和g DNA+適配體組(P0.05);適配體組定量測定值低于g DNA組和g DNA+適配體組(P0.05);g DNA組高于g DNA+適配體組(P0.05)。結(jié)論1 BHL DNA適配體不影響細(xì)菌增殖,不影響最終體系細(xì)菌密度。2 BHL DNA適配體在體外可有效干擾銅綠假單胞菌生物被膜的形成;3 BHL DNA適配體在體外可有效抑制銅綠假單胞菌綠膿菌素生物合成;4 BHL DNA適配體與e DNA共同干預(yù)生物被膜形成時,可削弱e DNA對生物被膜形成的促進(jìn)作用,仍能在一定程度上抑制生物被膜的形成。
【關(guān)鍵詞】：適配體 銅綠假單胞菌 群體感應(yīng)系統(tǒng) 生物被膜 綠膿菌素 eDNA
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R378
【目錄】：

• 附錄5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-15
• 第1章15-25
• 1. 材料15-16
• 1.1 實驗菌株15
• 1.2 適配體15
• 1.3 試劑配制15
• 1.4 培養(yǎng)基15-16
• 1.5 主要儀器和試劑16
• 2. 方法16-19
• 2.1 適配體對P.a.體外增殖的影響16
• 2.2 光學(xué)顯微鏡觀察體外生物被膜形成16-17
• 2.3 生物被膜檢測17-18
• 2.4 適配體抑制P.a.綠膿菌素生物合成18-19
• 3. 結(jié)果19-22
• 3.1 適配體對P.a.體外增殖的影響19
• 3.2 光學(xué)顯微鏡觀察適配體干擾生物被膜形成實驗19-20
• 3.3 生物被膜測定20-21
• 3.4 適配體抑制P.a.綠膿菌素生物合成21-22
• 4. 討論22-25
• 4.1 BHL適配體對細(xì)菌增殖的影響22
• 4.2 適配體體外干擾生物被膜形成22-23
• 4.3 適配體體外干擾綠膿菌素的產(chǎn)生23-25
• 第2章25-29
• 1. 材料25
• 1.1 實驗菌株25
• 1.2 培養(yǎng)基25
• 1.3 適配體25
• 1.4 主要儀器和試劑25
• 2. 方法25-27
• 2.1 P.a.基因組抽提25-26
• 2.2 e DNA與適配體干擾后P.a.生物被膜的定量測定26-27
• 3. 結(jié)果27
• 4. 討論27-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-35
• 綜述35-45
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 致謝45

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本文編號：350388