手足口病（hand,foot，and mouth disease,HFMD）是由多種腸道病毒感染引起的病毒性傳染病,常見于5歲及以下嬰幼兒,可導(dǎo)致手、足、臀、口周的斑丘疹、皰疹等臨床癥狀且常伴有發(fā)熱,少數(shù)嚴重患兒可出現(xiàn)腦膜炎、弛緩性麻痹、神經(jīng)源性肺水腫等一系列神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥,甚至死亡。目前,腸道病毒A組71型（enterovirus A71,EV-A71）是引起重癥手足口病的主要病原體,其致病機制尚不明確。非編碼區(qū)是EV-A71調(diào)控復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的重要部分,此區(qū)域可能與病毒復(fù)制效率、細胞嗜性及病毒毒力有關(guān)。對一些臨床分離毒株的研究和分析顯示EV-A71基因組的多個區(qū)域均存在影響病毒毒力的位點,對非編碼區(qū)（untranslated regions，UTRs）的研究是必不可少的一個環(huán)節(jié)。本研究基于EV-A71強毒株的感染性cDNA克隆,利用反向遺傳技術(shù)拯救非編碼區(qū)置換的重組病毒,在細胞和動物實驗中比較重組病毒與親本毒株復(fù)制力和致病力的異同,分別分析3,UTR和5’UTR在EV-A71毒力中的作用。目的:1.對EV-A71臨床分離株的3’UTR進行測序及分析,尋找病毒3’UTR的核苷酸特異性突變... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?９個ＥＶ－Ａ７１分離株３ＴＪＴＲ序列比對結(jié)果??

Ａ處理后構(gòu)建重組質(zhì)粒ｐＭＤ１９－Ｔ－３ＣＤ（１０７）－３＇ＵＴＲ（ｌ），?／／／ｎｄ川和Ｉ雙酶切電??泳鑒定，與插入的ＤＮＡ片段大小相符，且測序驗證序列無突變，重組質(zhì)粒構(gòu)建??成功（圖６）。??ｂｐ?Ｍ?１?ｂｐ?Ｍ?２?ｂＰ?Ｍ?Ｖ??ｊａ－?ｉ?＿??聲?Ｓ００－＿＿Ｂ?＿??ｉｏｏｏ?ＪＨ??２＾Ｓｅ?ＩＨｉ?－Ｓ??圖５?ＰＣＲ■產(chǎn)物??Ｍ：?ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｋｅｒ；?Ａ１？？片段?３ＣＤ（１０７），約?１．５ｋｂ；?Ｂ２：片段?３＇ＵＴＲ（１），約?１５０??ｂｐ；?Ｃ３：重組片段?３ＣＤ（１０７）－３０ＪＴＲ（１），約?１．６ｋｂ。??ｂｐ?Ｍ?１?２?３?４??３０００—??２〇〇〇－＾３Ｉ＾＾＾Ｅ！??１５００—??１０００—??５００—??２５０—??１００—??圖６重組質(zhì)粒ｐＭＤ１９－Ｔ－３ＣＤ（１０７）－３＇ＵＴＲ⑴酶切鑒定??４０??

株ｃＤＮＡ為模板擴增ＴＵＴＲ（ｌ）片段，長度約１５０ｂｐ；片段３ＣＤ（１０７）和３＇ＵＴＲ（１）??凝膠回收純化后進行融合ＰＣＲ，合成重組片段３ＣＤ（１０７）－３＇ＵＴＲ（Ｉ），約１．６ｋｂ大??小，ＰＣＲ產(chǎn)物片段大小均與預(yù)計相符（圖５）。重組片段３ＣＤ（１０７）－３ＷＴＲ（１）經(jīng)加??Ａ處理后構(gòu)建重組質(zhì)粒ｐＭＤ１９－Ｔ－３ＣＤ（１０７）－３＇ＵＴＲ（ｌ），?／／／ｎｄ川和Ｉ雙酶切電??泳鑒定，與插入的ＤＮＡ片段大小相符，且測序驗證序列無突變，重組質(zhì)粒構(gòu)建??成功（圖６）。??ｂｐ?Ｍ?１?ｂｐ?Ｍ?２?ｂＰ?Ｍ?Ｖ??ｊａ－?ｉ?＿??聲?Ｓ００－＿＿Ｂ?＿??ｉｏｏｏ?ＪＨ??２＾Ｓｅ?ＩＨｉ?－Ｓ??圖５?ＰＣＲ■產(chǎn)物??Ｍ：?ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｋｅｒ；?Ａ１？？片段?３ＣＤ（１０７），約?１．５ｋｂ；?Ｂ２：片段?３＇ＵＴＲ（１），約?１５０??ｂｐ；?Ｃ３：重組片段?３ＣＤ（１０７）－３０ＪＴＲ（１），約?１．６ｋｂ。??ｂｐ?Ｍ?１?２?３?４??３０００—??２〇〇〇－＾３Ｉ＾＾＾Ｅ！??１５００—??１０００—??５００—??２５０—??１００—??圖６重組質(zhì)粒ｐＭＤ１９－Ｔ－３ＣＤ（１０７）－３＇ＵＴＲ⑴酶切鑒定??４０??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Histopathological Features and Viral Antigen Distribution in the Lung of Fatal Patients with Enterovirus 71 Infection[J]. Zhenli Liang,Hongbo Pan,Xijing Wang,Yinchuan Zhu,Yiwu Dang,Xiaohui Fan,Lingxi Gao,Zengfeng Zhang.  Virologica Sinica. 2018(03)
[2]2008至2009年北京地區(qū)分離的腸道病毒71型全基因組序列分析[J]. 張慧娟,朱汝南,錢淵,鄧潔,趙林清,王芳,鄧莉,張艷玲.  中國循證兒科雜志. 2011(01)

碩士論文
[1]腸道病毒71型不同毒力表型株復(fù)制差異研究[D]. 孫樂樂.山東大學(xué) 2015



本文編號：3467139