發(fā)布時(shí)間：2021-10-30 09:59

　　目的1研究?jī)?nèi)皮源性27nt-mi RNA對(duì)主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）表型轉(zhuǎn)換及其相關(guān)分子機(jī)制。2探討內(nèi)皮源性27nt-mi RNA對(duì)主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞增殖、遷移及凋亡等細(xì)胞功能的影響。方法1慢病毒構(gòu)建、轉(zhuǎn)染及VSMCs去分化模型的建立慢病毒由上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司根據(jù)相應(yīng)的mi RNA序列設(shè)計(jì)、構(gòu)建,經(jīng)PCR鑒定及DNA測(cè)序比對(duì)分析確定載體構(gòu)建成功后用慢病毒包裝載體形成27nt-mi RNA高表達(dá)、anti-27nt-mi RNA及陰性對(duì)照NC慢病毒液。將慢病毒分別轉(zhuǎn)染VSMCs后,熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞綠色熒光表達(dá)情況以確定27nt-mi RNA細(xì)胞株建立情況。2檢測(cè)27nt-mi RNA對(duì)VSMCs表型轉(zhuǎn)換的影響根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求,將VSMCs隨機(jī)分五組:分別為正常對(duì)照組（normal）、PDGF-BB組、mimic 27nt-mi RNA+PDGF-BB組、Anti-27nt-mi RNA+PDGF-BB組、NC+PDGF-BB組。正常對(duì)照組的VSMCs不給予任何處理、PDGF-BB組的VSMCs用10 ng/... 

【文章來(lái)源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒載體結(jié)構(gòu)圖

方法SS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以 X±S 表示，兩兩比，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步比較用.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。體外生長(zhǎng)狀況條件下 VSMCs 呈長(zhǎng)梭形或多角形，少部分形態(tài)為，胞漿豐富，胞質(zhì)密度高，核呈卵圓形居中。剛復(fù)而且生長(zhǎng)速度較為緩慢，大約有 50% 的細(xì)胞貼壁隨著生長(zhǎng)環(huán)境慢慢的改善，細(xì)胞的生長(zhǎng)速度變快，排列成束，部分重疊，出現(xiàn)典型的“谷峰狀”生長(zhǎng)（如

2019 屆碩士學(xué)位論文 內(nèi)皮源性 27nt-miRNA 對(duì) VSMCs 表型轉(zhuǎn)換、增殖與凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制研究3.2 慢病毒感染條件確定檢測(cè) NC 慢病毒不同病毒滴度（MOI=30、50、70、80）感染 VSMCs后熒光表達(dá)強(qiáng)度確定感染條件，結(jié)果顯示隨著 MOI 值增加，細(xì)胞胞漿綠色熒光表達(dá)逐漸增強(qiáng)。MOI 為 30 時(shí)，極少量的細(xì)胞有微弱綠色熒光，MOI為 50 時(shí)，綠色熒光增強(qiáng)。當(dāng) MOI 為 80 時(shí)，細(xì)胞具有明顯可見(jiàn)的綠色熒光，感染效率可達(dá) 90% 左右，且細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)良好（見(jiàn)圖 1-3），說(shuō)明 MOI=80 為 VSMCs 慢病毒感染的最佳實(shí)驗(yàn)條件，可得到最佳轉(zhuǎn)染效率且不影響細(xì)胞生長(zhǎng)活性。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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