克隆并原核表達(dá)人含α/β水解酶結(jié)構(gòu)域絲氨酸酶16A（ABHD16A）基因,制備小鼠抗ABHD16A多克隆抗體。采用反轉(zhuǎn)錄PCR克隆ABHD16A的cDNA序列,對(duì)該序列進(jìn)行同源性分析,將克隆的ABHD16A cDNA序列克隆至原核表達(dá)載體pET-28a（+）導(dǎo)入E.coli BL21（DE3）進(jìn)行原核表達(dá),將純化ABHD16A的重組蛋白免疫小鼠制備多克隆抗血清。研究結(jié)果顯示,人ABHD16A cDNA序列長(zhǎng)度為1 677 bp,序列高度保守,并具有保守的脂肪酶樣基序和相應(yīng)的功能區(qū),原核表達(dá)的重組ABHD16A蛋白免疫小鼠后制備的多克隆抗血清在1∶5 000的稀釋度具有較好的抗原抗體結(jié)合活性。成功制備了小鼠抗人ABHD16A多克隆抗體。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 人肝癌HepG2細(xì)胞的培養(yǎng)
        1.2.2 hABHD16A
        1.2.3 重組hABHD16A的原核表達(dá)
        1.2.4 重組hABHD16A包涵體的純化
        1.2.5 免疫原制備與動(dòng)物免疫
        1.2.6 hABHD16A多克隆抗血清的制備、效價(jià)測(cè)定
        1.2.7 Western blot法檢測(cè)HepG2細(xì)胞與抗hABHD16A抗體結(jié)合情況
2 結(jié)果與分析
    2.1 hABHD16A cDNA的PCR擴(kuò)增與重組pMD19-T-hABHD16A的構(gòu)建
    2.2 ABHD16A序列分析
    2.3 pET28a-hABHD16A表達(dá)載體構(gòu)建
    2.4 重組hABHD16A的誘導(dǎo)表達(dá)與純化
    2.5 多克隆抗血清的制備與效價(jià)測(cè)定
    2.6 抗體結(jié)合活性檢測(cè)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]兔抗小鼠含SET結(jié)構(gòu)域（賴(lài)氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶）8（Setd8）多克隆抗體制備和應(yīng)用[J]. 馬海濤,郭佳倩,夏靜,牛長(zhǎng)敏,申雪沂,孫紅亞,鄭英.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2017(02)
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博士論文
[1]脂代謝相關(guān)基因ABHD5在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展及耐藥中的作用及機(jī)制研究[D]. 彭媛.第三軍醫(yī)大學(xué) 2017

碩士論文
[1]FLW牛CPT2、ABHD5、ACSL1基因單核苷酸多態(tài)性與生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)分析[D]. 劉小婷.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3447715