高危型人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）的持續(xù)感染與宮頸癌、陰道癌、口腔癌等惡性疾病的發(fā)生相關(guān),目前主要通過基于L1蛋白的HPV疫苗進(jìn)行預(yù)防。而假病毒（Pseudovirus,PsV）的高效穩(wěn)定生產(chǎn)是相關(guān)預(yù)防性疫苗免疫保護(hù)性評價的重要環(huán)節(jié)。為初步探究PsV生產(chǎn)過程中各質(zhì)粒的配比關(guān)系對不同型別PsV制備的影響。本實驗采用人乳頭瘤病毒的16型（HPV16）和18型（HPV18）兩種型別的相應(yīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞,編碼L1蛋白的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染質(zhì)量固定為10μg,分別改變編碼L2蛋白質(zhì)粒與EGFP報告質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染比例,通過計算PsV的TCID₅₀值、測定L1蛋白含量以及PsV的感染率對不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染配比下的假病毒進(jìn)行評估。結(jié)果顯示在HPV16PsV模型中,L1與L2轉(zhuǎn)染質(zhì)量比為10μg∶2μg時,可以得到TCID₅₀較高的PsV,而當(dāng)HPV18 PsV達(dá)到最大TCID₅₀時,L1與L2的配比為10μg∶1μg,其TCID₅₀略大于10μg∶2μg組;L1與L2比例為10μg∶2μg時兩種PsV皆... 

【文章來源】：病毒學(xué)報. 2020,36(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

Qiagen試劑盒提取的質(zhì)粒核酸電泳圖

TCID50測定結(jié)果顯示，在HPV16、HPV18 Ps V模型中，改變報告基因EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染質(zhì)量配比使得所產(chǎn)Ps V的TCID50及L1蛋白表達(dá)水平產(chǎn)生差異，但L1表達(dá)水平僅在HPV16 Ps V模型中表現(xiàn)出較強(qiáng)規(guī)律性（圖4):EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染質(zhì)量配比增大使得HPV16 Ps V的TCID50降低，但梯度配比6μg、8μg、10μg之間TCID50差異不顯著（paired T test,p分別為：0.1835、0.4226、0.4226），表明在EGFP取6μg～10μg時，所產(chǎn)假病毒均有較高TCID50值。另外，其L1蛋白表達(dá)水平隨EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染配比上升呈顯著下降趨勢，表明所制備Ps V液體中Ps V顆粒減少，不利于HPV結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究樣品制備。HPV18 Ps V的TCID50隨EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染配比上升先增后減，在配比為8μg時達(dá)到最大57252 TU/μL，其L1蛋白表達(dá)水平變化規(guī)律不明顯。圖3 不同L2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染配比下Ps V的感染率

不同L2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染配比下Ps V的感染率

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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