生物反應器搭建了現(xiàn)代動物生物技術與藥用蛋白表達制藥技術的橋梁,是現(xiàn)代生物技術領域的研究熱點,應用生物反應器來制備口服疫苗的研究,國內外鮮有報道。本研究針對人畜共患輪狀病毒病,設計了口服鐵蛋白納米疫苗生物反應器,并通過小鼠模型,對其免疫原性與保護能力進行了初步的驗證。研究結果如下:1、人輪狀病毒VP6蛋白及鐵蛋白Ferritin的原核表達及功能研究通過NCBI數(shù)據(jù)庫獲取人輪狀病毒VP6基因和鐵蛋白（Helicobacter pylor/non-haem iron-containing ferritin）的核苷酸序列,并克隆到pET-32a載體上。之后使用大腸桿菌表達系統(tǒng)表達得到了 rferritin,rVP6以及rVP6-ferritin融合蛋白,并對三種蛋白的IPTG誘導濃度、誘導時間和起始誘導菌液濃度（OD600）等表達條件進行了優(yōu)化探索。通過Ni2+親和層析及分子篩等方法純化得到了 ferritin,rVP6和rVP6-ferritin蛋白。使用透射電子顯微鏡觀察復性后的ferritin蛋白和VP6-ferritin可見兩種蛋白可以形成相似的納米顆粒,粒徑均一。使用純化得到的重組蛋... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１輪病毒性腹瀉引起的兒童死亡率的世界分布地圖

—??二??圖１－１輪病毒性腹瀉引起的兒童死亡率的世界分布地圖。陰影代表每個孩子５歲時的死亡風險??［３］??〇??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１：?Ｍａｐ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｗｏｒｌｄ?ｗｉｔｈ?ｅｓｔｉｍａｔｅｄ?ｍｏｒｔａｌｉｔｙ?ｆｒｏｍ?ｒｏｔａｖｉｒｕｓ?ｄｉａｒｒｈｅａ?Ｓｈａｄｉｎｇ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｒｉｓｋ??ｏｆ?ｄｅａｔｈ?ｐｅｒ?ｃｈｉｌｄ?ｂｙ?５?ｙｅａｒｓ?ｏｆ?ａｇｅ．??１．１．１輪狀病毒的結構??輪狀病毒（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ，?ＲＶ）是一種雙鏈ＲＮＡ病毒，屬于呼腸孤病毒科，輪狀病毒屬??［２６］。１９７３年，澳大利亞學者Ｂｉｓｈｏｐ首先在胃腸炎患者的十二指腸超薄切片中發(fā)現(xiàn)了輪狀??病毒，并在隨后的研究中確定了輪狀病毒與人類以及動物胃腸炎的關系［２７］，由于在電??子顯微鏡下其形似車輪狀，故命名為輪狀病毒［２８］。成熟的輪狀病毒顆粒是一個二十面??體結構，在電子顯微鏡下呈現(xiàn)為直徑約為６５－７５ｍｎ的特異性雙層衣殼結構［２９，３（）］。輪狀??病毒基因組由１１個雙鏈ＲＮＡ片段組成，包含在內層衣殼中，分別編碼６個結構蛋白??（ＶＰ１－４，?ＶＰ６，?ＶＰ７）和５個非結構蛋白（ＮＳＰ１－５）。其中，基因片段１，２，３和６分別編??碼核蛋白ＶＰ１

染病的傳播和爆發(fā)提供了一種非常有效的機制，每年可預防數(shù)百萬人的發(fā)病率和死亡率??ｆ１５＇自第一個疫苗被應用以來，疫苗的研發(fā)依次經(jīng)歷了異型毒株疫苗，減毒株疫苗，滅??活毒株疫苗，類毒素疫苗，病毒亞單位疫苗，重組活毒株疫苗和納米疫苗等（圖１－３）。??１８００?１９００?２０００??Ｊ?｜?｜????［＿?Ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ???Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ?ｌｌｌｌ???…Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ???：＿?—??ｆＳＺ—：——?Ｔｏｘｏｉｄ??：Ｓｕｂｕｎｉｔ??Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ??圖１－３不同類型疫苗的發(fā)展時間表。虛線表示這些種類在可預見的將來很可能仍然很重要［１５７］。由??冷色到暖色代表研究熱度。??Ｆｉｇ．?１－３?Ａ?ｔｉｍｅｌｉｎｅ?ｓｈｏｗｉｎｇ?ｗｈｅｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｌａｓｓｅｓ?ｏｆ?ｖａｃｃｉｎｅｓ?ｂｅｃａｍｅ?ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ?ａｖａｉｌａｂｌｅ?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｏｖｅｒｌａｐ??ｏｆ?ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ．?Ｌｉｇｈｔｅｒ／ｄａｓｈｅｄ?ｃｏｌｏｒｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ｔｈａｔ?ｔｈｅｓｅ?ｃｌａｓｓｅｓ?ｗｉｌｌ?ｍｏｓｔ?ｌｉｋｅｌｙ?ｒｅｍａｉｎ?ｉｍｐｏｒｔａｎｔ?ｆｏｒ?ｔｈｅ??ｆｏｒｅｓｅｅａｂｌｅ?ｆｕｔｕｒｅ?［１５７］．??世界衛(wèi)生組織認為理想疫苗應該具備適用性廣泛，免疫原性高且病原性較低，通過??無針頭方式接種，易于大規(guī)模生產且質控方式簡便和易于儲存及運輸。疫苗開發(fā)最開始??關注的是利用不同來源的病原體作為疫苗，要么是減毒活疫苗，要么是滅活疫苗。雖然??在許多不同的傳染性疾病中取得了成功

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]以Ad41為載體的輪狀病毒疫苗免疫效果初探[D]. 陳多靈.山東大學 2012



本文編號：3403747