目的研究河弧菌85003 VI型分泌系統(tǒng)VflT6SS2核心基因簇上游paar基因（AL536_RS29530）編碼蛋白的結(jié)構(gòu)特征、功能及其對(duì)河弧菌VflT6SS2功能的影響。方法利用自殺質(zhì)粒介導(dǎo)的同源重組技術(shù)構(gòu)建paar基因缺失株,PCR擴(kuò)增并克隆paar基因于pSRKTc表達(dá)載體獲得回補(bǔ)質(zhì)粒,導(dǎo)入相應(yīng)缺失株得到回補(bǔ)株。Western Blot（WB）檢測(cè)缺失株和回補(bǔ)株中T6SS效應(yīng)蛋白Hcp的表達(dá)和分泌,細(xì)菌殺菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)菌株殺菌毒力變化。熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)tssB2和hcp mRNA表達(dá)水平。啟動(dòng)子-Lux報(bào)告系統(tǒng)的冷光表型檢測(cè)確定VflT6SS2核心基因簇啟動(dòng)子及hcp啟動(dòng)子在野生株和缺失株背景下的活性差異。結(jié)果成功構(gòu)建河弧菌85003的paar基因的精確缺失株和相應(yīng)的回補(bǔ)株;WB檢測(cè)缺失株中Hcp的表達(dá)和分泌較野生株明顯降低,同時(shí)其對(duì)大腸埃希菌的菌間殺傷能力也降低,導(dǎo)入相應(yīng)回補(bǔ)質(zhì)�？墒谷笔е闔cp的表達(dá)、分泌和殺菌表型恢復(fù)到野生株水平;hcp和tssB2的mRNA水平檢測(cè)顯示缺失株低于野生株,差異有顯著性,但VflT6SS2核心基因簇的啟動(dòng)子活... 

【文章來源】：疾病監(jiān)測(cè). 2020,35(04)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

菌體沉淀和培養(yǎng)上清中Hcp蛋白的注：WT.野生型

河弧菌85003與大腸埃希菌MG1655的細(xì)菌競(jìng)爭(zhēng)Figure3CompetitionbetweenV.fluvialisstrain注：a.P＜

野生株和缺失株中重組報(bào)告質(zhì)粒冷光活性分析注：A.質(zhì)粒ptssD2a-lux；B.質(zhì)粒ptssD2b-lux；C.質(zhì)粒pVflT6SS2-lux；WT.野生型

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]河弧菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)的初步分析[D]. 趙萌.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心 2015



本文編號(hào)：3396148