為探究丙酮酸激酶M2（pyruvate kinase M2, PKM2）在TCRαβ⁺T細(xì)胞中的功能,研究制備了TCRαβ⁺T細(xì)胞條件性敲除PKM2小鼠。FACS檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PKM2缺失不影響小鼠外周淋巴器官中TCRαβ⁺CD4⁺與CD8⁺T細(xì)胞百分比、增殖能力及活化潛能。TCRαβ⁺T細(xì)胞特異性PKM2^-/-小鼠可在結(jié)腸組織中形成正常的Th1與Th17亞群,也可在體內(nèi)外誘導(dǎo)產(chǎn)生正常的Th1與Th17。PKM2缺失同樣不影響MC38移植瘤生長(zhǎng),也不改變移植瘤中TCRαβ⁺CD4⁺/CD8⁺T細(xì)胞比例和T細(xì)胞IFN-γ的表達(dá)。因而,TCRαβ⁺T細(xì)胞特異性PKM2^-/-小鼠具有正常的T細(xì)胞功能亞群。Western blotting表明,PKM2^-/-TCRαβ⁺CD4⁺

【文章來源】：現(xiàn)代免疫學(xué). 2020,40(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

PKM2缺失不影響小鼠外周淋巴結(jié)與脾臟中T細(xì)胞百分比

PKM2缺失后,T細(xì)胞各亞群百分比沒有發(fā)生變化,而PKM2所參與的糖酵解途徑會(huì)影響細(xì)胞增殖[21],因而,作者推測(cè)PKM2缺失可能會(huì)影響T細(xì)胞的增殖能力。為此,研究進(jìn)一步分析CD4+與CD8+T細(xì)胞、Tconv與Treg Ki-67表達(dá)(圖2A)。無論是在外周淋巴結(jié)(圖2B)還是在脾臟(圖2C)中,各T細(xì)胞亞群Ki-67表達(dá)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。再進(jìn)一步,研究分離小鼠脾臟中CD4+T細(xì)胞,使用CTV染料標(biāo)記并在體外TCR活化條件下檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況(圖2D)。與PKM2+/+CD4+T細(xì)胞相比,無論是否有PKM2激活劑TEPP-46處理,PKM2-/-CD4+T細(xì)胞的增殖能力差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖2E)。因此,PKM2缺失并不影響T細(xì)胞的增殖。2.3 PKM2缺失不影響T細(xì)胞的活化

激活TCR后,CD4+與CD8+T細(xì)胞都會(huì)上調(diào)PKM2的表達(dá)。因而,作者猜想PKM2缺失可能會(huì)影響CD4+與CD8+T細(xì)胞的活化潛能。為此,本研究用FACS檢測(cè)PKM2fl/flCd4-Cre-與PKM2fl/flCd4-Cre+小鼠外周淋巴結(jié)與脾臟 CD4+和CD8+T細(xì)胞中細(xì)胞活化標(biāo)志分子CD44與CD62L的表達(dá)(圖3A)。但是,無論是CD4+T細(xì)胞(圖3B)還是CD8+T細(xì)胞(圖3C),其CD44-CD62L+、CD44+CD62L+與CD44+CD62L-T細(xì)胞百分比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。研究進(jìn)一步從小鼠脾臟中分離出CD4+T細(xì)胞,檢測(cè)其活化狀態(tài)在體外隨TCR刺激時(shí)間增加而產(chǎn)生的變化。結(jié)果表明,細(xì)胞活化相關(guān)分子CD25與CD69在TCR刺激48 h內(nèi)的任一時(shí)間點(diǎn),CD4+T細(xì)胞的活化水平不因PKM2缺失表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。所以,PKM2缺失并不影響T細(xì)胞的活化(圖3D～3G)。2.4 PKM2缺失不影響CD4+T細(xì)胞Th1與Th17亞群產(chǎn)生


本文編號(hào)：3388113