本文關(guān)鍵詞：論文一：V型并指（趾）小鼠模型建立及形態(tài)學(xué)分析 論文二：成骨不全癥致病突變譜研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：并指是一種因肢端發(fā)育期間相鄰的手指和/或腳趾間的連接無法正常分離,而引起的肢端畸形。并指是一種最常見的遺傳性肢端畸形,新生兒中的發(fā)病率為0.30‰-1‰。其中V型并指患者手部畸形特征表現(xiàn)為4-5掌骨融合,其它主要表現(xiàn)為2-5指尺側(cè)偏位及遠(yuǎn)節(jié)指骨短小、3-4或4-5并指、第5指短小或彎曲、屈指和中遠(yuǎn)指節(jié)間關(guān)節(jié)褶消失；足部畸形共同表現(xiàn)為：趾骨外翻,跖骨內(nèi)翻,第1趾(跖)骨粗大,第2-5趾(跖)骨發(fā)育不良,第5趾(跖)骨短。V型并指呈常染色體顯性遺傳,在本課題組的早期工作中,曾在一個中國人v型并指大家系中發(fā)現(xiàn)了HOXD13基因內(nèi)的一個錯義突變。在這個V型并指家系中,所有患者存在HOXD13基因內(nèi)錯義突變c.950AG(Q317R)；該突變位于HOXD13蛋白的同源結(jié)構(gòu)域(Homeobox domain, HD)內(nèi),導(dǎo)致HD第50位的谷氨酰胺變?yōu)榫彼帷ｓw外實驗表明該突變導(dǎo)致其與DNA特異性結(jié)合能力的下降。HOXD13是同源盒轉(zhuǎn)錄因子家族(HOX基因家族)的重要成員之一,在脊椎動物胚胎發(fā)育的模式形成中具有重要作用。本研究在前期工作的基礎(chǔ)上以HOXD13基因突變Q50R為切入點,借助TALEN(轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶)技術(shù)構(gòu)建Hoxd13Q50R突變體小鼠模型,擬通過對模型小鼠進(jìn)行表型分析及分子生物學(xué)分析,明確Hoxd13基因突變與肢端畸形的相關(guān)性,闡明V型SD的致病機制。目前,外觀觀察和骨骼CT結(jié)果顯示Hoxd13Q50R雜合、純合突變小鼠肢端外形和骨骼形態(tài)均有明顯畸形,說明HOXD13基因內(nèi)HD-Q50R突變是導(dǎo)致人V型并指(趾)的致病原因。成骨不全癥俗稱脆骨病。成骨不全患者的骨骼較脆弱易骨折,但表型的嚴(yán)重性有顯著差異。成骨不全還具有骨骼畸形、牙本質(zhì)發(fā)育不全、耳聾及淺灰色或藍(lán)色鞏膜等表型。目前,已知的成骨不全癥致病基因共有十三種,90%以上的OI患者由編碼Ⅰ型膠原的COL1A1和COL1A2的雜合突變引起。剩下患者可能的致病原因有：某些基因中的致病改變引起了骨骼過度礦化或礦化不足,或影響了Ⅰ型膠原的轉(zhuǎn)錄后修飾、折疊、分泌、加工,還有可能是因成骨細(xì)胞發(fā)育有關(guān)的基因出現(xiàn)了致病改變。本研究中綜合運用PCR-DNA測序、二代測序、多重連接探針擴增技術(shù)(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)對成骨不全癥致病基因進(jìn)行突變研究。酚/氯仿法提取先證者、家系成員外周全血基因組DNA,二代測序或PCR擴增COL1A/A2編碼區(qū)及外顯子/內(nèi)含子交界區(qū),PCR產(chǎn)物進(jìn)行sanger測序。對于未發(fā)現(xiàn)突變的患者考慮拷貝數(shù)變異,利用MLPA技術(shù)(P271/P272)對COL1A1/A2進(jìn)行重復(fù)和缺失突變篩查。最后,對COL1A1/A2也未檢測到拷貝數(shù)變異的患者,對成骨不全隱性致病基因進(jìn)行PCR-sanger測序篩查突變。本研究中,我們共在200例成骨不全癥家系中,檢出COL1A1/A2點突變及微缺失突變132例(COL1A1突變78例,COL1A2突變54例),其中通過二代測序方法篩查出突變46例,PCR-sanger測序法篩查出突變84例。突變類型多為以甘氨酸突變?yōu)橹鞯腻e義突變、無義突變和剪接位點突變。利用MLPA技術(shù)發(fā)現(xiàn)大片段缺失突變兩例。隱性基因WNT1中發(fā)現(xiàn)c.397GA (Ala133Thr)/c.677CT (Ser226Leu)復(fù)合雜合突變一個。運用多種技術(shù)構(gòu)建成骨不全癥篩查平臺,能有效提高成骨不全癥致病突變檢出率,實驗結(jié)果豐富了中國人成骨不全癥突變譜。
【關(guān)鍵詞】：V型并指(趾) Hoxd13基因 基因突變 轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶 成骨不全癥 二代測序 sanger測序 多重連接探針擴增技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R682.15;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 第一部分 V型并指(趾)小鼠模型的建立及形態(tài)學(xué)分析9-34
• 一、前言9-12
• 二、材料與方法12-24
• 1. 實驗材料12-14
• 1.1. 主要儀器設(shè)備12-13
• 1.2. 主要試劑及試劑盒13-14
• 2. 實驗方法14-24
• 2.1. 利用TALEN技術(shù)構(gòu)建Hoxd13Q50R突變小鼠模型14-20
• 2.2. F0代小鼠Hoxd13同源基因脫靶效應(yīng)的排除20-22
• 2.3. 小鼠種系傳遞22-23
• 2.4. PET-CT實驗過程23-24
• 三、結(jié)果24-29
• 1. FO代陽性突變鼠的鑒定結(jié)果24-25
• 1.1. 基因組DNA-PCR瓊脂糖凝膠電泳24
• 1.2. PCR產(chǎn)物酶切鑒定24-25
• 2. F1代小鼠測序結(jié)果分析25-26
• 2.1. 基因組DNA PCR瓊脂糖凝膠電泳25
• 2.2. PCR產(chǎn)物酶切鑒定25-26
• 3. F0代小鼠Hoxd13同源基因脫靶效應(yīng)的排除結(jié)果26-27
• 4. 表型分析27-29
• 4.1. 外觀分析27-28
• 4.2. 骨骼分析28-29
• 四、討論29-31
• 五、小結(jié)31-32
• 六、參考文獻(xiàn)32-34
• 第二部分：成骨不全癥致病突變譜研究34-70
• 一、前言34-35
• 二、材料與方法35-61
• 1. 實驗材料35-38
• 1.1. 研究對象35
• 1.2. 主要儀器設(shè)備和試劑材料35-38
• 2. 實驗方法38-61
• 2.1. 家系調(diào)查及樣本采集38
• 2.2. 基因組DNA的提取38
• 2.3. COL1A1/COL1A2基因的點突變篩查38-42
• 2.4. Ion Torrent下一代測序平臺篩查COL1A1和COL1A2基因突變42-54
• 2.5. COL1A1/COL1A2基因的拷貝數(shù)變異檢查54-55
• 2.6. OI相關(guān)隱性基因的突變檢測55-61
• 三、實驗結(jié)果61-65
• 1. COL1A1/COL1A2測序結(jié)果分析61
• 2. MLPA篩查COL1A1和COL1A2拷貝數(shù)變異結(jié)果61-63
• 3. 成骨不全癥隱性基因測序結(jié)果分析63-65
• 四、討論65-67
• 五、小結(jié)67-68
• 六、參考文獻(xiàn)68-70
• 致謝70-71
• 附錄一 英漢名詞對照及縮寫71-73
• 附錄二：分析軟件及常用網(wǎng)址73-74
• 非Ⅰ型膠原成骨不全癥致病基因綜述74-80
• 參考文獻(xiàn)78-80
• 個人簡介80-81

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1 陳福全;骨肽治療成骨不全癥臨床觀察[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2005年20期

2 鐘元枝;莊帝錢;羅榮;符水;;小兒成骨不全癥2例[J];罕少疾病雜志;2006年01期

3 Zack P.;Franck L.;Devile C.;Clark C.;余曉梅;;成骨不全癥患兒的骨折性和非骨折性疼痛[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(兒科學(xué)分冊);2006年03期

4 榮增輝;;成骨不全癥1例[J];重慶醫(yī)學(xué);2006年07期

5 陳波濤;李永文;;成骨不全癥1例[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2007年29期

6 迪麗努爾·米吉提;依帕古力;;成骨不全癥7例分析[J];中國誤診學(xué)雜志;2010年21期

7 鐘盛林;謝蘭祥;;一個成骨不全癥患者的家系[J];遺傳與疾病;1984年01期

8 吳懷安;鄧小敏;;成骨不全癥調(diào)查研究[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;1998年01期

9 朱蓉;成骨不全癥1例[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;2000年01期

10 劉翠香,張燦欣,王守滿;成骨不全癥5例報道[J];中醫(yī)正骨;2000年08期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 任秀智;;罕見疾病成骨不全癥治療誤區(qū)[A];新觀點新學(xué)說學(xué)術(shù)沙龍文集50：我國罕見疾病研究關(guān)鍵問題與對策[C];2011年

2 于明禮;董玉梅;席斌;沈海麗;王軼;;先天形成骨不全癥2例報道[A];全國自身免疫性疾病專題研討會暨第十一次全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

3 徐士斌;;成骨不全癥5例報告[A];2001年全國醫(yī)學(xué)影像技術(shù)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

4 劉怡;李梅;;成骨不全癥的分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次中青年骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2013年

5 張浩;柯耀華;岳華;肖文金;章振林;;LEPRE1基因突變導(dǎo)致的成骨不全癥兩例[A];中華醫(yī)學(xué)會第三次骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病中青年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

6 趙殿輝;;表現(xiàn)為骨痂異常增生的成骨不全癥一例報道及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[A];第十次全國中西醫(yī)結(jié)合影像學(xué)術(shù)研討會暨全國中西醫(yī)結(jié)合影像學(xué)研究與診斷學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2009年

7 張浩;柯耀華;岳華;肖文金;章振林;;LEPRE1基因突變導(dǎo)致的成骨不全癥兩例[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

8 任秀智;曾裴;蔡少華;孫永勝;;多段截骨矯形髓內(nèi)固定治療兒童成骨不全癥[A];第十八屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

9 張浩;柯耀華;岳華;肖文金;章振林;;LEPRE1基因突變導(dǎo)致的成骨不全癥兩例[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

10 何紅;孟文芳;丁芳;李麗紅;;成骨不全癥伴發(fā)瓣膜性心臟病一例[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 白毅;成骨不全癥患者生存狀況調(diào)研結(jié)果發(fā)布[N];中國醫(yī)藥報;2013年

2 記者 甘貝貝;近三成“瓷娃娃”無法上普校[N];健康報;2014年

3 記者 郭彥;首個罕見病專項公募基金設(shè)立[N];北京社區(qū)報;2009年

4 華文;雙磷酸鹽 治療“成骨不全癥”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2002年

5 本報實習(xí)記者 甘貝貝;“瓷娃娃”的痛是社會之痛[N];健康報;2009年

6 白毅　天白 (本報記者 白毅);讓罕見病患者少承受些生命之痛[N];中國醫(yī)藥報;2010年

7 韓丹;不做脆弱的瓷娃娃[N];中國企業(yè)報;2010年

8 張肖;用愛心讓“瓷娃娃”們變得更堅強[N];中國社會報;2010年

9 本報記者 王京雪　實習(xí)生 陳瓊;隱形群體:“瓷娃娃”的艱難自救[N];新華每日電訊;2011年

10 本報記者 馬曉雪;易碎的“瓷娃娃”[N];哈爾濱日報;2011年

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1 汪涵;論文一：V型并指（趾）小鼠模型建立及形態(tài)學(xué)分析 論文二：成骨不全癥致病突變譜研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

2 王子強;成骨不全患者血清中骨相關(guān)microRNAs差異表達(dá)的研究[D];濟(jì)南大學(xué);2012年

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