目的構(gòu)建微小脲原體UP3-00235基因的原核表達載體,并對其編碼蛋白質(zhì)進行生物信息分析。方法利用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計引物,利用PCR方法克隆UP3-00235基因（片段大小為483bp）。使用限制性核酸內(nèi)切酶雙酶切UP3-00235基因和pGEX-6p-2載體質(zhì)粒,室溫下用T4連接酶連接2.5h,連接后轉(zhuǎn)入大腸埃希菌感受態(tài)中,IPTG誘導(dǎo)GST-UP3-00235蛋白的表達,并對其進行生物信息學(xué)分析。結(jié)果成功構(gòu)建了pGEX-6p-2-UP3-00235重組質(zhì)粒,測序后與NCBI中已錄入的Ureaplasma parvum strain hebnu uu3序列進行比對,同源性100%。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸埃希菌后經(jīng)IPTG誘導(dǎo)3h,表達出GST-UP3-00235融合蛋白,與預(yù)期大致相符。經(jīng)生物信息學(xué)軟件分析,UP3-00235基因編碼蛋白質(zhì)含有160個氨基酸,分子式為C₈₂₃H₁₃₃₉N₂₄₁O₂₅₁S₃,相對分子質(zhì)量為18.73×10³

【文章來源】：中國病原生物學(xué)雜志. 2020,15(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

UP3-00235基因PCR產(chǎn)物1%瓊脂糖凝膠電泳分析

UP3-00235基因PCR產(chǎn)物及pGEX-6p-2載體質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸埃希菌XL1-Blue，在含AMP的LB固體培養(yǎng)基培養(yǎng)。對氨芐青霉素抗性初篩后生長的菌落進一步應(yīng)用菌落PCR驗證。菌落PCR所用引物為針對pGEX-6p-2的通用引物，擴增后經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果顯示擴增產(chǎn)物約為626bp（包括目的片段483bp，通用引物143bp），與預(yù)期大致一致（圖2）。3 pGEX-6p-2-UP3-00235重組質(zhì)粒測序分析

選擇菌落PCR擴增陽性的菌落進一步純培養(yǎng)后，送公司測序。pGEX-6p-2-UP3-00235重組質(zhì)粒測序結(jié)果見圖3，初步分析未見移碼現(xiàn)象出現(xiàn)。進一步利用DANMAN軟件對測序結(jié)果與NCBI中U.parvum strain hebnu uu3進行序列比對，同源性為100%，表明堿基序列完全正確。4 GST-UP3-00235融合蛋白的表達、純化及SDS-PAGE鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
[1]男性解脲脲原體感染對精液質(zhì)量的影響[J]. 張育超.  內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志. 2019(04)
[2]解脲脲原體感染對精子血管內(nèi)皮生長因子及其受體表達和精子頂體酶的影響[J]. 馬曉萍,岳應(yīng)權(quán),高曉勤.  實用醫(yī)學(xué)雜志. 2019(06)
[3]羊傳染性胸膜肺炎支原體RPS11基因的原核表達及間接ELISA檢測方法的建立[J]. 王璇,吳玙彤,潘淑惠,黃波,高明琴,文正常.  中國動物傳染病學(xué)報. 2020(01)
[4]微小脲原體致病因素的研究進展[J]. 趙紅英,汪五清.  中國皮膚性病學(xué)雜志. 2018(10)
[5]解脲脲原體UP3c0006基因原核表達載體的構(gòu)建及表達[J]. 馬良,宋佳欣,賈澤瑋,孫浩月,李雪婷,賈天軍.  中國病原生物學(xué)雜志. 2017(09)



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