發(fā)布時間：2021-08-13 07:48

　　目的:分別采用摘除淚腺法和淚腺注射肉毒桿菌毒素A法誘導(dǎo)大鼠干眼癥模型,通過對比兩種干眼癥模型的臨床表現(xiàn)、病理學(xué)特點和細(xì)胞因子變化,探討其優(yōu)缺點和適用范圍。方法:健康8周齡雄性Brown Norway大鼠30只,隨機(jī)分為3組:A組左眼為空白組,B組摘除大鼠左側(cè)主淚腺,C組左側(cè)淚腺注射肉毒桿菌毒素A。比較實驗前1d,實驗后3、7、14、28、42d的淚液分泌量（SⅠt）、淚膜破裂時間（BUT）、角膜熒光素鈉染色評分的變化。42d觀察結(jié)膜、角膜和淚腺組織病理學(xué)改變;通過實時熒光定量PCR對白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和上皮生長因子（EGF）表達(dá)量進(jìn)行檢測。結(jié)果:實驗后第3d開始,B、C組均出現(xiàn)淚液分泌量持續(xù)性減少,與A組均有差異（P<0.05）;實驗后第7d開始,B、C組均出現(xiàn)BUT持續(xù)性縮短以及角膜上皮染色明顯增多,與A組比較有差異（P<0.05）;以上臨床數(shù)據(jù)B、C組間比較均無差異（P>0.05）。A組角膜上皮細(xì)胞形態(tài)正常,B組及C組角膜上皮均存在不同程度表層細(xì)胞絲狀分離,結(jié)膜杯狀細(xì)胞數(shù)目明顯減少,C組淚腺組織明顯萎縮。B、C組結(jié)膜和角膜組織... 

【文章來源】：國際眼科雜志. 2020,20(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

RT-PCR結(jié)果

實驗后第42d,處死余下大鼠,分別取左眼結(jié)膜及角膜組織,使用動物組織總RNA提取試劑盒提取細(xì)胞總RNA,紫外分光光度計檢測其純度和濃度,并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄獲取cDNA。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作為內(nèi)參對照的校準(zhǔn)基因(PCR擴(kuò)增細(xì)胞的標(biāo)志性基因)。引物序列:EGF上游引物為5"-TCGGTGCTGTGCGATTTA-3",下游引物為 5"-TTTCTGGCAGTTCTCCTC-3";IL-6上游引物為5"-CAGTTGCCTTCTTGGGACT-3",下游引物為3"-GCTCTGAATGACTCTGGCTT-5";TNF-α上游引物為5"-CACGTCGTAGCAAACCACCAA-3",下游引物為3"-GTTGGTTGTCTTTGAGATCCAT-5"。采用SYBR green I作為熒光信號對以上指標(biāo)進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增,通過計算2-△△ct值取平均值繪制各指標(biāo)表達(dá)量對比圖。PCR反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性10min;94℃ 15s、60℃ 1min,40個循環(huán);95℃ 15s、60℃ 1min、95℃ 15s至反應(yīng)結(jié)束。表1 A、B、C組淚液分泌試驗酚紅棉線長度測量比較 ( x ˉ ±s,mm) 組別 實驗前1d 實驗后第3d 實驗后第7d 實驗后第14d 實驗后第28d 實驗后第42d A組 7.44±0.43 7.34±0.38 7.33±0.27 7.34±0.31 7.30±0.27 7.34±0.30 B組 7.32±0.30 6.12±0.38a,c 4.54±0.45a,c,e 3.83±0.41a,c,e,g 3.83±0.54a,c,e,g 3.52±0.63a,c,e,g C組 7.41±0.35 6.22±0.68a,c 5.38±1.50a,c,e 3.61±0.71a,c,e,g 3.52±0.56a,c,e,g 3.34±0.75a,c,e,g 注:A組:左眼不予任何處理作為空白組;B組:摘除左側(cè)主淚腺;C組:左側(cè)淚腺注射肉毒桿菌毒素A。F組間=383.59,P組間<0.001;F時間=161.50,P時間<0.001;F組間×時間=36.04,P組間×時間<0.001。aP<0.05 vs A組;cP<0.05 vs 本組實驗前第1d;eP<0.05 vs 本組實驗后第3d;gP<0.05 vs 本組實驗后第7d。

HE和PAS染色

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]富血小板血漿（PRP）裂解液在苯扎溴胺誘導(dǎo)的小鼠干眼治療中的作用[J]. 胡曉琴,張夢瑤,朱佩文,袁晴,黎彪,葛倩敏,梁榮斌,李秋玉,邵毅.  眼科新進(jìn)展. 2019(11)
[2]Evaluation of a rat meibomian gland dysfunction model induced by closure of meibomian gland orifices[J]. Zi-Yi Dong,Ming Ying,Jie Zheng,Lan-Jun Hu,Jiang-Yan Xie,Yi Ma.  International Journal of Ophthalmology. 2018(07)
[3]重組胸腺素β4在干眼模型中對炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及對眼表修復(fù)的影響[J]. 張慧芹,李穎,馮麗娜,許永根.  中華實驗眼科雜志. 2017 (02)
[4]Effect of trapping vascular endothelial growth factor-A in a murine model of dry eye with inflammatory neovascularization[J]. Jin Woo Kwon,Jin A Choi,Eun Young Shin,Tae Yoon La,Dong Hyun Jee,Yeon Woong Chung,Yang Kyung Cho.  International Journal of Ophthalmology. 2016(11)
[5]BTX-B誘導(dǎo)大鼠干眼模型的建立及評價標(biāo)準(zhǔn)[J]. 朱海峰,郝兆芹,程鈺,高偉.  國際眼科雜志. 2015(09)
[6]摘除主淚腺干眼病鼠淚液功能變化與凋亡相關(guān)基因蛋白的表達(dá)[J]. 周楊,王傳富,姜濤.  中華眼科雜志. 2007 (01)



本文編號：3340037