近幾年,隨著臨床上癌癥治療、器官移植中免疫抑制劑的使用以及艾滋病等疾病導(dǎo)致的免疫受損患者的增多,真菌感染的發(fā)病率也在不斷攀升。院內(nèi)血源性感染中真菌感染已經(jīng)上升至第4位。即便在現(xiàn)有的抗真菌藥物治療下,系統(tǒng)性真菌感染導(dǎo)致的死亡率仍高達(dá)40%-70%�，F(xiàn)有的抗真菌治療手段有限,而唑類藥物作為常用抗真菌藥物出現(xiàn)了嚴(yán)重的耐藥現(xiàn)象。在經(jīng)過(guò)唑類藥物長(zhǎng)期治療的患者中,分離的白念珠菌對(duì)唑類藥物的耐藥率高達(dá)40%。因此,闡明唑類藥物的耐藥機(jī)制,尋找新的抗真菌治療的手段是臨床抗真菌感染急需解決的問(wèn)題。白念珠菌對(duì)于唑類藥物的耐藥機(jī)制研究已經(jīng)取得了一些進(jìn)展,主要是關(guān)于唑類合成通路以及外排泵相關(guān)基因的突變和高表達(dá)導(dǎo)致的耐藥問(wèn)題。闡明白念珠菌對(duì)于靶向于麥角甾醇合成的唑類藥物的耐藥機(jī)制,解決唑類耐藥問(wèn)題,需要徹底闡明白念珠菌麥角甾醇合成通路的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。已有的研究表明,白念珠菌甾醇合成通路主要通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子Upc2p調(diào)控相關(guān)甾醇合成酶的表達(dá)。但在釀酒酵母中,甾醇合成的調(diào)控不僅局限于轉(zhuǎn)錄水平還包括翻譯后調(diào)控等方式,但這種翻譯后調(diào)控的方式在白念珠菌中很少有文獻(xiàn)報(bào)道,仍需要進(jìn)一步研究。本文選取了與釀酒酵母中調(diào)控羥甲基戊二酰乙酰... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：132 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

PCR驗(yàn)證NSG2敲除菌和回復(fù)菌的正確性

在構(gòu)建了?７Ｖ５Ｇ２基因缺失菌后，我們考察了?ＪＶ５Ｇ２基因?qū)τ诎啄钪榫L(zhǎng)和菌??絲形成方面的影響。生長(zhǎng)曲線測(cè)定顯示，７Ｖ５Ｇ２基因缺失菌生長(zhǎng)速率與親本菌ＳＮ１５２??和ＭＧ２回復(fù)菌一致，說(shuō)明７ＶＳＧ２對(duì)于白念珠菌的增殖速率并無(wú)影響（圖１．２Ａ）。??菌絲和被膜形成是白念珠菌致病力的關(guān)鍵影響因素，白念珠菌中存在大量基因通過(guò)??調(diào)控白念珠菌菌絲和被膜形成影響白念珠菌的毒力，本實(shí)驗(yàn)初步考察了?７Ｖ５Ｇ２對(duì)于??是否參與了白念珠菌菌絲和被膜的形成。通過(guò)利用菌絲誘導(dǎo)培養(yǎng)基ｓｐｉｄｅｒ和Ｌｅｅ’ｓ在??３７°Ｃ條件下誘導(dǎo)菌絲發(fā)現(xiàn)，ＭＧ２缺失菌菌絲形成并無(wú)缺陷，在兩種菌絲誘導(dǎo)培養(yǎng)基??中均能形成正常菌絲（圖１．２Ｂ）。利用ＸＴＴ染色法，我們考察了?ＭＧ２缺失菌在??ＲＰＭＩ１６４０培養(yǎng)基中的被膜形成情況，結(jié)果顯示ＭＧ２缺失后被膜形成無(wú)差異。本部??分，初步考察了?缺失菌的生長(zhǎng)及毒力因子相關(guān)表型，證明基因并不影??響白念珠菌正常的生長(zhǎng)增殖和菌絲形成。??Ａ．?Ｂ．?ｃ－?１＇５＇??ｌ?＊ｎＳｇ２Ａ／Ａ?Ｓｐｉｄｅｒ?，?【４秦＇鐵篆雇?Ｎ?１．０－?ｒ＝－ｌ?￣?ｆ＾－ｌ?ｒ＝ｎ??ｓ３°－?；?．．?§〇．＝－??§２０－?／??ＬＪ??Ｌｅｅ

海軍軍醫(yī)大學(xué)博士畢業(yè)論文??但對(duì)于兩性霉素Ｂ，７Ｖ５Ｇ２基因缺失菌比親本菌ＳＮ１５２和ＭＧ２基因回復(fù)菌更耐受??（圖１．３）。這一結(jié)果提示我們ＭＧ２基因參與調(diào)控白念珠菌中甾醇的合成，但與釀??酒酵母７Ｖ５Ｇ２缺失導(dǎo)致的洛伐他汀敏感表型并不一致，說(shuō)明基因在釀酒酵母??和白念珠囷中功能并不完全￣■致。??ＳＮ１５２?ｒ?Ｔ?Ｔ??ｎｓｇ２６／＾－ｌ?ｌ??ｎｓｇ２Ａ／Ａ＋ＮＳＧ２?ＯｌＺ２３？Ｑ??ＹＰＤ?ＦＬＣ?ＩＴＣ??ＳＮ１５２?＾ｏｒ＾ｐｐＢｉ?ｒ??ｎｓｇ２Ａ／Ａ－ｌ?｜?■?＇??ｎｓｇ２／３／Ｗ?匿?＇：：．錢．：泛??ｎｓａ２ａ／Ａ＋ＮＳＧ２?ＴＭ?＾?ｉｆ??ＫＴＣ?ＭＣＺ?ＬＯＶ??ＳＮ１５２?＿?善??—｜．?ｍｔｍ?：??ｎｓｇＺＡ／Ａ－２??ｎｓｇ２Ａ／Ａ＋ＮＳＧ２??Ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ?Ｆｅｎｐｒｏｐｉｍｏｒｐｉｎ?ＡｍＢ??圖１．３?７＾（７２缺失菌對(duì)于卩坐類藥物敏感性升高。３０（＾３８３７檢測(cè)８＞１１５２、？＾２』／＾－１、？７嘆２」／＾－２、??ｍｇ２Ｊ／』＋ＮＳＧ２對(duì)于不同抑制劑的敏感性，氟康唑（ＦＬＣ）?５｜ｉｇ／ｍｌ，伊曲康唑（ＩＴＣ）?２．５ｇｇ／ｍｌ，??酮康唑（ＫＴＣ）?２．５ｎｇ／ｍｌ，咪康唑（ＭＣＺ）?２．５（ｉｇ／ｍｌ，洛伐他�。ǎ蹋希郑�?８｜ｉｇ／ｍｌ，特比萘芬??２．５ｐｇ／ｍｌ，丁苯嗎啉?２．５｜ｉｇ／ｍｌ，兩性霉素?Ｂ?（ＡｍＢ）?０．５｜ｉｇ／ｍｌ〇??４．?ＭＧ２基因缺失后影響白念珠菌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和通透性??唑類藥物通過(guò)抑制真菌麥角留醇合成和毒性留醇的累積影響真菌細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)??和功能

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]白色念珠菌誘導(dǎo)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡的基因調(diào)控[J]. 陳欲曉,韋超凡.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2000(03)



本文編號(hào)：3339066