背景:孤兒核受體Rev-erbα已被證明在骨代謝過程中發(fā)揮著重要作用,但其在調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化過程中的具體機制尚不明確。目的:研究孤兒核受體Rev-erbα是否參與小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化能力的調(diào)節(jié)。方法:以全骨髓貼壁法進行小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng),構(gòu)建攜帶Rev-erbα基因的慢病毒載體并轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的第3代骨髓間充質(zhì)干細胞,轉(zhuǎn)染后48 h采用Real Time PCR法檢測Rev-erbα基因水平的表達。實驗分為3組:實驗組骨髓間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)染過表達Rev-erbα基因及EGFP基因的慢病毒載體,陽性對照組骨髓間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)染含EGFP基因的空病毒載體,設立不含病毒原液的陰性對照組,分別進行成骨誘導并在第0,7,14天采用Real Time PCR法檢測成骨分化相關(guān)指標堿性磷酸酶、骨橋蛋白、骨鈣素的表達變化。結(jié)果與結(jié)論:①攜帶Rev-erbα基因的慢病毒成功轉(zhuǎn)染到骨髓間充質(zhì)干細胞中并穩(wěn)定表達;②隨著成骨誘導時間延長,成骨相關(guān)指標堿性磷酸酶、骨橋蛋白表達增加,但組間差異無顯著性意義,骨鈣素表達增加,但實驗組明顯低于陽性對照組和對照組（P<0.05）;③結(jié)果... 

【文章來源】：中國組織工程研究. 2020,24(31)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

PCR擴增產(chǎn)物及陽性克隆篩選

在成骨誘導后第0,7,14天分別用Real Time PCR檢測成骨相關(guān)標志物堿性磷酸酶、骨橋蛋白、骨鈣素m RNA水平。堿性磷酸酶表達隨成骨誘導時間延長逐漸增加，但實驗組與陽性對照組及陰性對照組間比較差異無顯著性意義(P>0.05)，見圖3。骨橋蛋白表達在第7天較高，而第14天表達減少，但組間比較差異仍無顯著性意義(P>0.05)，見圖4。骨鈣素表達隨成骨誘導逐漸增加，但實驗組骨鈣素表達明顯低于陽性對照組及陰性對照組(P<0.05)，說明過表達Rev-erbα抑制了骨鈣素的表達，見圖5。圖3 各組骨髓間充質(zhì)干細胞成骨誘導過程中堿性磷酸酶(ALP)m RNA相對表達

各組骨髓間充質(zhì)干細胞成骨誘導過程中堿性磷酸酶(ALP)m RNA相對表達

【參考文獻】：
期刊論文
[1]小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化中的核受體Rev-erbα及Rorα[J]. 林富偉,徐曉梅,崔琰,謝乙加,趙青.  中國組織工程研究. 2018(17)
[2]MicroRNA-regulated viral vectors for gene therapy[J]. Anja Geisler,Henry Fechner.  World Journal of Experimental Medicine. 2016(02)
[3]骨鈣素介導的骨內(nèi)分泌系統(tǒng)[J]. 王春玉,龍豐云,陳香,余希杰.  中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志. 2013(03)



本文編號：3330252