發(fā)布時(shí)間：2021-08-07 09:51

　　目的觀察融合蛋白胞質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)肽（CTP）-HBcAg18-27-Tapasin誘導(dǎo)C57BL/6小鼠T淋巴細(xì)胞分泌Th1型細(xì)胞因子及HBV特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（CTL）的表達(dá)。方法 C57BL/6小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組CTP-HBcAg18-27-Tapasin、對照組CTP-HBcAg18-27、HBcAg18-27-Tapasin及空白組（生理鹽水）。經(jīng)肌肉免疫小鼠,ELISA檢測T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子;流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測T淋巴細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子;CCK-8法檢測T淋巴細(xì)胞增殖活性。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組能有效刺激小鼠T細(xì)胞分泌Th1型細(xì)胞因子;FCM檢測實(shí)驗(yàn)組融合蛋白誘導(dǎo)的CTL水平明顯高于其他組;且實(shí)驗(yàn)組T淋巴細(xì)胞增殖活性明顯高于對照組及空白組。結(jié)論 CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫C57BL/6小鼠后,能提高T淋巴細(xì)胞增殖活性,能有效刺激T淋巴細(xì)胞分泌Th1型細(xì)胞因子及增加CTLs的表達(dá)。 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2013,29(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

流式細(xì)胞術(shù)檢測不同組別T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞因子

IFN-γ分泌量的影響，采用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行CD8α和IFN-γ雙標(biāo)檢測(圖5)，結(jié)果提示CTP-HB-cAg18－27-Tapasin融合蛋白免疫小鼠后的T淋巴細(xì)胞中產(chǎn)生IFN-γ的CTL數(shù)量高于對照組和空白組(圖1、2，P＜0．05)。圖1流式細(xì)胞術(shù)檢測不同組別T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞因子1:CTP-HBcAg18－27-Tapasin組;2:CTP-HBcAg18－27組;3:HBcAg18－27-Tapasin組;4:空白組．a(chǎn)P＜0．05vs空白組;cP＜0．05vsHBcAg18－27-Tapasin組;eP＜0．05vsCTP-HBcAg18－27組．圖2流式細(xì)胞術(shù)檢測不同組別CD8a/IFN-γ雙陽性細(xì)胞數(shù)百分比2．3T淋巴細(xì)胞增殖活性檢測各組T淋巴細(xì)胞經(jīng)ConA溶液刺激，采用CCK-8比色法檢測，CTP-HBcAg18－27-Tapasin組淋巴細(xì)胞增殖活性顯著高于CTP-HBcAg18－27組、HBcAg18－27-Tapasin組及空白組(圖3，P=0．000)。1:CTP-HBcAg18－27-Tapasin組;2:CTP-HBcAg18－27組;3:HBcAg18－27-Tapasin組;4:空白組．a(chǎn)P＜0．05vs空白組;cP＜0．05vsHBcAg18－27-Tapasin組;eP＜0．05vsCTP-HBcAg18－27組．圖3各組小鼠T淋巴細(xì)胞增殖活性3討論我國是HBV感染的高發(fā)國家，現(xiàn)有的慢性HBV感染者約9300萬人，其中慢性乙型肝炎患者約2000萬例［10］。慢性HBV感染是一個(gè)病毒不斷復(fù)制和宿主抗病毒免疫能力低下的復(fù)雜過程，以致乙肝病毒能逃逸機(jī)體的免疫，導(dǎo)致慢性感染。所以決定慢性乙型肝炎轉(zhuǎn)歸的一個(gè)主要因素是機(jī)體的免疫反應(yīng)能力，尤其是CTL的反應(yīng)水平，因此活化特異性CTL反應(yīng)是清除體內(nèi)HBV感染的關(guān)鍵。CTL細(xì)胞的激活和分化需要Thl類細(xì)胞因子，研究表明，HBV慢性感染者Th1，Th2類細(xì)胞因子失衡，Th1型免疫不足使機(jī)體免疫系統(tǒng)不能產(chǎn)生足量的CTL細(xì)胞和Th1型細(xì)胞因子以殺傷、破壞病毒感

。圖1流式細(xì)胞術(shù)檢測不同組別T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞因子1:CTP-HBcAg18－27-Tapasin組;2:CTP-HBcAg18－27組;3:HBcAg18－27-Tapasin組;4:空白組．a(chǎn)P＜0．05vs空白組;cP＜0．05vsHBcAg18－27-Tapasin組;eP＜0．05vsCTP-HBcAg18－27組．圖2流式細(xì)胞術(shù)檢測不同組別CD8a/IFN-γ雙陽性細(xì)胞數(shù)百分比2．3T淋巴細(xì)胞增殖活性檢測各組T淋巴細(xì)胞經(jīng)ConA溶液刺激，采用CCK-8比色法檢測，CTP-HBcAg18－27-Tapasin組淋巴細(xì)胞增殖活性顯著高于CTP-HBcAg18－27組、HBcAg18－27-Tapasin組及空白組(圖3，P=0．000)。1:CTP-HBcAg18－27-Tapasin組;2:CTP-HBcAg18－27組;3:HBcAg18－27-Tapasin組;4:空白組．a(chǎn)P＜0．05vs空白組;cP＜0．05vsHBcAg18－27-Tapasin組;eP＜0．05vsCTP-HBcAg18－27組．圖3各組小鼠T淋巴細(xì)胞增殖活性3討論我國是HBV感染的高發(fā)國家，現(xiàn)有的慢性HBV感染者約9300萬人，其中慢性乙型肝炎患者約2000萬例［10］。慢性HBV感染是一個(gè)病毒不斷復(fù)制和宿主抗病毒免疫能力低下的復(fù)雜過程，以致乙肝病毒能逃逸機(jī)體的免疫，導(dǎo)致慢性感染。所以決定慢性乙型肝炎轉(zhuǎn)歸的一個(gè)主要因素是機(jī)體的免疫反應(yīng)能力，尤其是CTL的反應(yīng)水平，因此活化特異性CTL反應(yīng)是清除體內(nèi)HBV感染的關(guān)鍵。CTL細(xì)胞的激活和分化需要Thl類細(xì)胞因子，研究表明，HBV慢性感染者Th1，Th2類細(xì)胞因子失衡，Th1型免疫不足使機(jī)體免疫系統(tǒng)不能產(chǎn)生足量的CTL細(xì)胞和Th1型細(xì)胞因子以殺傷、破壞病毒感染的靶細(xì)胞，病毒基因復(fù)制得不到抑制;而Th2型細(xì)胞因子又可抑制Th1型免疫應(yīng)答，最終導(dǎo)致HBV慢性感染［11］。在HBV免疫應(yīng)答過程中，病毒作為細(xì)胞內(nèi)抗原，主要經(jīng)過內(nèi)源性抗原加工和遞呈途徑啟動免疫應(yīng)答，這?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能的檢測[J]. 劉紅紅,陳小華,周麗芹,劉雪妮,余永勝,臧國慶,湯正好.  中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué). 2012(01)
[2]PTD-HBcAg融合蛋白經(jīng)樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)特異性CTL抑制HBV的體外研究[J]. 陳小華,潘慶春,余永勝,湯正好,臧國慶.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2009(04)
[3]PTD-HBcAg體外誘導(dǎo)小鼠髓源性樹突狀細(xì)胞成熟及在T淋巴細(xì)胞增殖中的作用[J]. 陳小華,潘慶春,余永勝,韓進(jìn)超,臧國慶.  中華傳染病雜志. 2009 (04)
[4]清胰化積方聯(lián)合IL-2對胰腺癌小鼠脾淋巴細(xì)胞功能的影響[J]. 張劍軍,陳震,劉魯明,羅建民.  中華中醫(yī)藥雜志. 2009(02)



本文編號：3327576