本文關(guān)鍵詞：SpA單結(jié)構(gòu)域突變體組合噬菌體文庫的構(gòu)建及體外進(jìn)化篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的使用人免疫球蛋白G(IgG)對(duì)金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)單結(jié)構(gòu)域突變體組合文庫進(jìn)行體外分子進(jìn)化篩選,判斷不同突變體組合的特異結(jié)合優(yōu)勢(shì),探索優(yōu)勢(shì)組合分子結(jié)構(gòu)與功能間的關(guān)系。方法通過Overlap PCR獲得SPA中A和C單結(jié)構(gòu)域突變體片段組合構(gòu)成的噬菌體文庫,再使用人IgG對(duì)文庫進(jìn)行體外親和篩選,期望通過對(duì)特定結(jié)合分子的定向改造及體外進(jìn)化獲得具有高結(jié)合優(yōu)勢(shì)的組合分子。結(jié)果成功構(gòu)建符合體外篩選要求的SPA單結(jié)構(gòu)域A在29、30位氨基酸定點(diǎn)突變文庫(A1)、SPA單結(jié)構(gòu)域C在36、37位定點(diǎn)突變文庫(C1)和SPA單結(jié)構(gòu)域A在37位后插入3個(gè)氨基酸隨機(jī)肽(AI37)、SPA單結(jié)構(gòu)域C在20位后插入3個(gè)隨機(jī)連接肽(CI20),將A1、C1隨機(jī)組合構(gòu)建的噬菌體展示文庫命名為庫A1C1,將AI37、CI20隨機(jī)組合構(gòu)建的噬菌體展示文庫命名為庫AI37CI20。兩個(gè)文庫各自經(jīng)過4、5輪親和篩選,文庫進(jìn)化完全。Phage-ELISA高光密度值的單克隆,測(cè)序結(jié)果分析為A(Q29K30)A(I29I30)和AI-TQSA。結(jié)論通過定向改造技術(shù)獲得了高結(jié)合能力的定點(diǎn)突變分子A(Q29K30)A(I29I30)和插入突變分子AI37-TQSA,為Ig結(jié)合分子的定向改造及具有新的Ig結(jié)合特性的重組Ig結(jié)合分子的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)教研室;第二軍醫(yī)大學(xué)病原生物學(xué)教研室;安慶醫(yī)藥高等�？茖W(xué)校;
【關(guān)鍵詞】： AC突變體 噬菌體展示文庫 篩選 人免疫球蛋白G
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(編號(hào):SS2014AA021403) 國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):30872405、30472050、30972632) 上海市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)科研計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):08JC1405200)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 2015-04-29接收自然界中許多細(xì)菌表達(dá)多種與宿主免疫球蛋白、血清白蛋白、纖維蛋白原等血清蛋白有結(jié)合活性的蛋白[immunogiobulin(Ig)-binding protions,IB-PS][1],介導(dǎo)細(xì)菌致病性。其中,典型代表有金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)、鏈球菌蛋白G及大消化鏈球菌蛋白L[2-4]。是由多個(gè)

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 沈毅s，

本文編號(hào)：329470