研究背景巨噬細(xì)胞是人體內(nèi)第一道免疫防線。在不同的局部微環(huán)境中,巨噬細(xì)胞具有極強(qiáng)的可塑性,能表現(xiàn)出截然不同的功能狀態(tài),而這些功能狀態(tài)具有抑制或促進(jìn)疾病進(jìn)展的作用。因此針對(duì)巨噬細(xì)胞不同的功能表型及其內(nèi)在機(jī)制的研究得到人們的極大關(guān)注。前期大量研究結(jié)果表明:巨噬細(xì)胞的功能表型表達(dá)異常,與多種影響人們生活質(zhì)量和預(yù)期生命周期的免疫相關(guān)性疾病密切相關(guān),如感染、自身免疫性疾病以及腫瘤等。巨噬細(xì)胞的促炎表型過(guò)強(qiáng),導(dǎo)致自身免疫性疾病加重并進(jìn)一步破壞人體自身正常組織;而促炎表型過(guò)弱,則導(dǎo)致感染性疾病進(jìn)行性加重或腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。與巨噬細(xì)胞的表型與其細(xì)胞內(nèi)部的葡萄糖代謝方式密切相關(guān)。供能影響巨噬以調(diào)控其最終改善細(xì)胞免疫球蛋白及粘蛋白-3（T cell immunoglobulin and mucin domain 3,Tim-3）,是一類(lèi)表達(dá)于巨噬細(xì)胞、DC、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞以及支氣管上皮細(xì)胞等多種細(xì)胞上的跨膜蛋白。由于Tim-3與其配體結(jié)合后能通過(guò)誘導(dǎo)凋亡等機(jī)制抑制細(xì)胞活化,維持體內(nèi)免疫耐受,因此被認(rèn)為是新一代的免疫調(diào)控靶點(diǎn)。完全有意義的是,我們前期研究提示,T從的角度,闡明,可,Tim-3信號(hào)是否調(diào)控... 

【文章來(lái)源】：軍事科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

使用sTim-3阻斷巨噬細(xì)胞Tim-3信號(hào)后，培養(yǎng)液上清的顏色變化

圖 2 Western Blot 鑒定 Trx、sTim-3 蛋白功能通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)方法獲得 Trx，sTim-3 蛋白后，使用 His 抗體通過(guò) Western Blot 鑒定 Trx 與 sTim-3 蛋白是否具有 His 蛋白結(jié)構(gòu)（圖 A），使用鼠源 Tim-3 抗體確認(rèn)Trx 與 sTim-3 能否特異性結(jié)合 Tim-3（圖 B）。3.2 sTim-3 阻斷小鼠巨噬細(xì)胞后的培養(yǎng)液酸堿度變化使用 Trx（對(duì)照）、sTim-3 阻斷鼠源巨噬細(xì)胞 Raw 264.7 的 Tim-3 信號(hào)后，分別維持刺激 0、6、12、24、36、48h，收集細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行 PH 值檢測(cè)（圖 3）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在阻斷 12h（t=7.676，p=0.0016）、24h（t=9.177，p=0.0008）、36h（t=13.64，p=0.0002）、48h（t=10.50，p=0.0005）時(shí)的組間 PH 差異均具有統(tǒng)計(jì)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中阻斷 24h 的樣品組之間 PH 值出現(xiàn)顯著下降。因此下一步實(shí)驗(yàn)中擬設(shè)定 24h 為T(mén)im-3 信號(hào)刺激實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

3 阻斷小鼠巨噬細(xì)胞 Tim-3 信號(hào)不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)的培養(yǎng)液 PH 值變im-3 分別阻斷巨噬細(xì)胞 Tim-3 信號(hào) 0、6、12、24、36、48h（n=3儀測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液上清中 PH 值，并以 Trx 組為對(duì)照，進(jìn)行相互比,**p<0.01，與對(duì)照組比較-3 信號(hào)激活/阻斷對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的影響用不同濃度的 Tim-3 信號(hào)激活/阻斷劑連續(xù)刺激巨噬細(xì)胞 48h，信號(hào)照）與 sTim-3（實(shí)驗(yàn)）組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖 5A）；信號(hào)激活組的im-3Agonis（t實(shí)驗(yàn)）組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差（圖 5B）。因此，使用最高濃度達(dá)-3 信號(hào)激活劑或 20μg/ml 的信號(hào)阻斷劑，連續(xù)刺激巨噬細(xì)胞 48h 并期產(chǎn)生明顯影響。


本文編號(hào)：3270479