Tim-3對巨噬細(xì)胞糖代謝的調(diào)節(jié)機制研究
發(fā)布時間:2021-07-07 22:23
研究背景巨噬細(xì)胞是人體內(nèi)第一道免疫防線。在不同的局部微環(huán)境中,巨噬細(xì)胞具有極強的可塑性,能表現(xiàn)出截然不同的功能狀態(tài),而這些功能狀態(tài)具有抑制或促進疾病進展的作用。因此針對巨噬細(xì)胞不同的功能表型及其內(nèi)在機制的研究得到人們的極大關(guān)注。前期大量研究結(jié)果表明:巨噬細(xì)胞的功能表型表達(dá)異常,與多種影響人們生活質(zhì)量和預(yù)期生命周期的免疫相關(guān)性疾病密切相關(guān),如感染、自身免疫性疾病以及腫瘤等。巨噬細(xì)胞的促炎表型過強,導(dǎo)致自身免疫性疾病加重并進一步破壞人體自身正常組織;而促炎表型過弱,則導(dǎo)致感染性疾病進行性加重或腫瘤的進展和轉(zhuǎn)移。與巨噬細(xì)胞的表型與其細(xì)胞內(nèi)部的葡萄糖代謝方式密切相關(guān)。供能影響巨噬以調(diào)控其最終改善細(xì)胞免疫球蛋白及粘蛋白-3(T cell immunoglobulin and mucin domain 3,Tim-3),是一類表達(dá)于巨噬細(xì)胞、DC、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞以及支氣管上皮細(xì)胞等多種細(xì)胞上的跨膜蛋白。由于Tim-3與其配體結(jié)合后能通過誘導(dǎo)凋亡等機制抑制細(xì)胞活化,維持體內(nèi)免疫耐受,因此被認(rèn)為是新一代的免疫調(diào)控靶點。完全有意義的是,我們前期研究提示,T從的角度,闡明,可,Tim-3信號是否調(diào)控...
【文章來源】:軍事科學(xué)院北京市
【文章頁數(shù)】:90 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
使用sTim-3阻斷巨噬細(xì)胞Tim-3信號后,培養(yǎng)液上清的顏色變化
圖 2 Western Blot 鑒定 Trx、sTim-3 蛋白功能通過上述實驗方法獲得 Trx,sTim-3 蛋白后,使用 His 抗體通過 Western Blot 鑒定 Trx 與 sTim-3 蛋白是否具有 His 蛋白結(jié)構(gòu)(圖 A),使用鼠源 Tim-3 抗體確認(rèn)Trx 與 sTim-3 能否特異性結(jié)合 Tim-3(圖 B)。3.2 sTim-3 阻斷小鼠巨噬細(xì)胞后的培養(yǎng)液酸堿度變化使用 Trx(對照)、sTim-3 阻斷鼠源巨噬細(xì)胞 Raw 264.7 的 Tim-3 信號后,分別維持刺激 0、6、12、24、36、48h,收集細(xì)胞培養(yǎng)液進行 PH 值檢測(圖 3)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在阻斷 12h(t=7.676,p=0.0016)、24h(t=9.177,p=0.0008)、36h(t=13.64,p=0.0002)、48h(t=10.50,p=0.0005)時的組間 PH 差異均具有統(tǒng)計統(tǒng)計學(xué)意義,其中阻斷 24h 的樣品組之間 PH 值出現(xiàn)顯著下降。因此下一步實驗中擬設(shè)定 24h 為Tim-3 信號刺激實驗時間。
3 阻斷小鼠巨噬細(xì)胞 Tim-3 信號不同時間節(jié)點的培養(yǎng)液 PH 值變im-3 分別阻斷巨噬細(xì)胞 Tim-3 信號 0、6、12、24、36、48h(n=3儀測定細(xì)胞培養(yǎng)液上清中 PH 值,并以 Trx 組為對照,進行相互比,**p<0.01,與對照組比較-3 信號激活/阻斷對巨噬細(xì)胞增殖的影響用不同濃度的 Tim-3 信號激活/阻斷劑連續(xù)刺激巨噬細(xì)胞 48h,信號照)與 sTim-3(實驗)組間無統(tǒng)計學(xué)差異(圖 5A);信號激活組的im-3Agonis(t實驗)組間無統(tǒng)計學(xué)差(圖 5B)。因此,使用最高濃度達(dá)-3 信號激活劑或 20μg/ml 的信號阻斷劑,連續(xù)刺激巨噬細(xì)胞 48h 并期產(chǎn)生明顯影響。
本文編號:3270479
【文章來源】:軍事科學(xué)院北京市
【文章頁數(shù)】:90 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
使用sTim-3阻斷巨噬細(xì)胞Tim-3信號后,培養(yǎng)液上清的顏色變化
圖 2 Western Blot 鑒定 Trx、sTim-3 蛋白功能通過上述實驗方法獲得 Trx,sTim-3 蛋白后,使用 His 抗體通過 Western Blot 鑒定 Trx 與 sTim-3 蛋白是否具有 His 蛋白結(jié)構(gòu)(圖 A),使用鼠源 Tim-3 抗體確認(rèn)Trx 與 sTim-3 能否特異性結(jié)合 Tim-3(圖 B)。3.2 sTim-3 阻斷小鼠巨噬細(xì)胞后的培養(yǎng)液酸堿度變化使用 Trx(對照)、sTim-3 阻斷鼠源巨噬細(xì)胞 Raw 264.7 的 Tim-3 信號后,分別維持刺激 0、6、12、24、36、48h,收集細(xì)胞培養(yǎng)液進行 PH 值檢測(圖 3)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在阻斷 12h(t=7.676,p=0.0016)、24h(t=9.177,p=0.0008)、36h(t=13.64,p=0.0002)、48h(t=10.50,p=0.0005)時的組間 PH 差異均具有統(tǒng)計統(tǒng)計學(xué)意義,其中阻斷 24h 的樣品組之間 PH 值出現(xiàn)顯著下降。因此下一步實驗中擬設(shè)定 24h 為Tim-3 信號刺激實驗時間。
3 阻斷小鼠巨噬細(xì)胞 Tim-3 信號不同時間節(jié)點的培養(yǎng)液 PH 值變im-3 分別阻斷巨噬細(xì)胞 Tim-3 信號 0、6、12、24、36、48h(n=3儀測定細(xì)胞培養(yǎng)液上清中 PH 值,并以 Trx 組為對照,進行相互比,**p<0.01,與對照組比較-3 信號激活/阻斷對巨噬細(xì)胞增殖的影響用不同濃度的 Tim-3 信號激活/阻斷劑連續(xù)刺激巨噬細(xì)胞 48h,信號照)與 sTim-3(實驗)組間無統(tǒng)計學(xué)差異(圖 5A);信號激活組的im-3Agonis(t實驗)組間無統(tǒng)計學(xué)差(圖 5B)。因此,使用最高濃度達(dá)-3 信號激活劑或 20μg/ml 的信號阻斷劑,連續(xù)刺激巨噬細(xì)胞 48h 并期產(chǎn)生明顯影響。
本文編號:3270479
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