目的建立穩(wěn)定、高效的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）培養(yǎng)及外泌體提取方法。方法通過全骨髓、差速貼壁并輔助以低氧（5%O₂）環(huán)境的方法進(jìn)行小鼠BM-MSCs培養(yǎng),收集細(xì)胞,鑒定干細(xì)胞表面標(biāo)志物,進(jìn)行成骨、成脂及成軟骨誘導(dǎo);并收集上清液,超速分離的方法提取外泌體后鑒定。結(jié)果小鼠BM-MSCs生長狀態(tài)好,第3代細(xì)胞就可達(dá)到95%以上的純度且可穩(wěn)定傳代至15代左右,表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）標(biāo)志物,且可被成功誘導(dǎo)分化成骨、成脂肪及軟骨組織。超速離心得到的細(xì)胞外囊泡具有典型外泌體樣結(jié)構(gòu),Western blot鑒定顯示具有外泌體特征性蛋白標(biāo)志物。結(jié)論全骨髓培養(yǎng)方法使得小鼠BM-MSCs的損失最少,低氧（5%O₂）環(huán)境下的差速貼壁法使得小鼠BM-MSCs增殖速度快,純度高。該方法培養(yǎng)的小鼠BM-MSCs可穩(wěn)定分泌外泌體囊泡,為小鼠MSCs的培養(yǎng)及其外泌體獲取提供了良好的方法。 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,55(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

小鼠BM-MSCs外泌體的提取與鑒定

小鼠BM-MSCs培養(yǎng)及傳代 ×200

流式細(xì)胞術(shù)鑒定BM-MSCs表面標(biāo)志物

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成骨細(xì)胞的研究現(xiàn)狀[J]. 師彬,楊武斌,王平.  中國實驗方劑學(xué)雜志. 2014(19)
[2]人骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞分泌外泌體特性研究[J]. 馮影,盧士紅,王昕,崔俊杰,李雪,杜文靜,王影,李娟娟,宋保全,陳芳,馬鳳霞,池穎,楊少光,韓忠朝.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2014(03)
[3]小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)和鑒定方法學(xué)探討[J]. 銀廣悅,陳素萍,丁俊麗,張繼領(lǐng),劉繼勇,張龍,張明.  中國實驗診斷學(xué). 2013(04)
[4]兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)后的活力檢測[J]. 孔根現(xiàn),蔣知新,沙杭,張清華.  中國組織工程研究. 2013(01)
[5]生命科學(xué)研究中常用模式生物[J]. 王凱.  生命科學(xué)研究. 2010(02)
[6]間充質(zhì)干細(xì)胞在低氧環(huán)境下的增殖、代謝與成骨分化:胎盤羊膜及骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞的對比[J]. 陳亭,周燕,張治萍,譚文松.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2010(06)
[7]小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察[J]. 宮曉潔,孫莉,黎靖宇,陳維平.  解剖學(xué)研究. 2008(01)



本文編號：3262826