目的:建立經(jīng)濟、高效的非疫區(qū)實驗室細粒棘球蚴生發(fā)細胞的原代培養(yǎng)方法。制備細粒棘球絳蟲水通道蛋白9的多克隆抗體,確定其在細粒棘球蚴生發(fā)細胞內(nèi)的細胞定位及在原頭蚴、棘球蚴囊壁中的組織分布。為進一步研究細粒棘球蚴水通道蛋白與囊液形成之間的關系奠定基礎。方法:1.0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液對鼠源次生細粒棘球蚴囊壁消化10³0 min后進行貼壁,探索最佳消化時間。2.倒置顯微鏡下觀察以最佳消化時間消化后的細粒棘球蚴囊壁殘片貼壁培養(yǎng)法和單純組織貼壁培養(yǎng)法行生發(fā)細胞培養(yǎng)的細胞形態(tài)改變并對比生長曲線。3.免疫熒光鑒定經(jīng)殘片培養(yǎng)法獲得的細粒棘球蚴生發(fā)細胞。4.行經(jīng)殘片培養(yǎng)法獲得的細粒棘球蚴生發(fā)細胞的小鼠腹腔返種試驗并取病變組織行HE染色后觀察。5.利用生物信息學的方法預測Eg AQP 9的亞細胞定位。6.利用生物信息學的方法分析并設計EgAQP 9序列免疫多肽并免疫新西蘭兔。7.SDS-PAGE檢測制備的Eg AQP 9多肽抗體的純化效果,酶聯(lián)免疫吸附試驗測定該多抗滴度。8.免疫印跡法鑒定EgAQP 9蛋白。免疫熒光檢測EgAQP 9在細粒棘球蚴生發(fā)細胞內(nèi)的細胞定位,免疫組化... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

典型生發(fā)細胞形態(tài)(×400)

包括梭形、三角形、橢圓形或者圓形（圖 1）。觀察消化后掉落的生發(fā)層小殘片可見典型生發(fā)細胞游出狀態(tài)（圖2）。待生發(fā)細胞貼壁后密切觀察其增殖狀態(tài)，動態(tài)觀察可發(fā)現(xiàn)其以集落狀態(tài)向四周發(fā)散，中央處細胞密集，細胞形狀似鵝卵石，外周擴散的細胞呈現(xiàn)梭狀（圖 4b）。圖 1 典型生發(fā)細胞形態(tài) ( ×400)a:三角形； b:梭型； c：圓形； d：橢圓形Fig. 1 Typical morphology of germinal cell ( ×400)a：triangled cell; b: spindled cell; c:rounded cell; d:oval cell

圖 3 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁殘片后培養(yǎng) 2 d 時的生發(fā)細胞的游出狀態(tài)（ ×400）a： 胰蛋白酶溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁碎片 10 min 后培養(yǎng)，殘片組織邊緣游離出完整的生發(fā)細胞，幾乎不見裸核且胞質(zhì)豐富且呈明顯梭型化；b：胰蛋白酶溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁碎片 20 min 后培養(yǎng)，殘片組織邊緣游離出相對完整的生發(fā)細胞，含少量裸核且胞質(zhì)豐富、多橢圓形和圓形；c: 胰蛋白酶溶液消化鼠源次生棘球蚴囊壁碎片 30 min 后培養(yǎng)，殘片組織邊緣游離出生發(fā)細胞，多僅存在裸核且細胞破裂，有散在的鈣顆粒。Fig. 3 The released germinal cells from digested debris of hydatid cyst walls from mice andcultured for 2 days（ ×400）a: After digestion with trypsin solution for 10 min, the intact and spindle-shaped germinal cellswere released from the edge of the cyst walls debris, with few naked nuclei and abundantcytoplasm; b: After digestion with trypsin solution for 20 min, relatively intact germinal cellswere released from the edge of the cyst walls debris, with a few naked nuclei and abundant

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3256340