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體外構建人羊膜間充質干細胞膜片及成骨分化潛能

發(fā)布時間:2021-06-27 20:50
  背景:人羊膜間充質干細胞屬于成體干細胞,其來自于廢棄的胎盤,來源廣泛,可以無創(chuàng)獲取,具有免疫原性低、生長周期短等特點,是組織工程種子細胞的重要來源,目前人羊膜間充質干細胞已經用于臨床糖尿病的治療。目的:探索一種簡便的方法構建人羊膜間充質干細胞膜片,并研究其成骨分化潛能。方法:將第3代人羊膜間充質干細胞高密度接種于普通培養(yǎng)皿中,加入成膜片誘導培養(yǎng)基以構建人羊膜間充質干細胞膜片,通過組織學染色以及掃描電鏡觀察細胞膜片的特性。取第3代人羊膜間充質干細胞高密度接種于培養(yǎng)皿中,加入成膜片誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)7 d,再換用成骨誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)14 d以構建成骨誘導的人羊膜間充質干細胞膜片。通過茜素紅染色、免疫組化染色、堿性磷酸酶活性、RT-PCR以及Westernblot檢測人羊膜間充質干細胞膜片的成骨分化潛能。結果與結論:①蘇木精-伊紅染色可見人羊膜間充質干細胞膜片由多層細胞累積而成,細胞分布均勻;②掃描電鏡觀察可見人羊膜間充質干細胞膜片呈復層結構,胞外有大量的胞外基質產生,細胞包埋于胞外基質中;③人羊膜間充質干細胞膜片成骨誘導14 d,茜素紅染色后可見橘紅色沉淀,免疫組化染色后細胞周圍有大量Ⅰ型膠原產... 

【文章來源】:中國組織工程研究. 2020,24(25)北大核心

【文章頁數(shù)】:5 頁

【部分圖文】:

體外構建人羊膜間充質干細胞膜片及成骨分化潛能


人羊膜間充質干細胞膜片組織學觀察及掃描電鏡檢測

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成骨誘導人羊膜間充質干細胞膜片茜素紅染色、免疫組化染色及堿性磷酸酶活性定量檢測

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圖3 成骨誘導人羊膜間充質干細胞膜片茜素紅染色、免疫組化染色及堿性磷酸酶活性定量檢測實驗成功構建了人羊膜間充質干細胞膜片,但是獲取的細胞膜片是否具有成骨分化潛能,對于組織工程骨的構建至關重要。該實驗利用成骨誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)人羊膜間充質干細胞膜片,培養(yǎng)14 d后堿性磷酸酶活性明顯增高;茜素紅染色結果顯示細胞外基質中有橘紅色的結節(jié)產生;免疫組化結果顯示細胞周圍有大量Ⅰ型膠原產生;RT-PCR和Western blot結果顯示Ⅰ型膠原、骨鈣蛋白以及Runt相關轉錄子2的mRNA水平及其蛋白表達明顯增高,差異有顯著性意義(P<0.05),表明誘導的人羊膜間充質干細胞膜片具有良好的成骨分化潛能。

【參考文獻】:
期刊論文
[1]同種異體骨移植與自體骨移植修復四肢粉碎性骨折:骨性愈合及骨活性比較[J]. 杜輝,付勤.  中國組織工程研究. 2015(08)
[2]Cell sheet technology for regeneration of esophageal mucosa[J]. Ryo Takagi,Masayuki Yamato,Nobuo Kanai,Daisuke Murakami,Makoto Kondo,Takaaki Ishii,Takeshi Ohki,Hideo Namiki,Masakazu Yamamoto,Teruo Okano.  World Journal of Gastroenterology. 2012(37)



本文編號:3253582

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