發(fā)布時間：2021-06-27 20:50

　　背景:人羊膜間充質(zhì)干細胞屬于成體干細胞,其來自于廢棄的胎盤,來源廣泛,可以無創(chuàng)獲取,具有免疫原性低、生長周期短等特點,是組織工程種子細胞的重要來源,目前人羊膜間充質(zhì)干細胞已經(jīng)用于臨床糖尿病的治療。目的:探索一種簡便的方法構(gòu)建人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片,并研究其成骨分化潛能。方法:將第3代人羊膜間充質(zhì)干細胞高密度接種于普通培養(yǎng)皿中,加入成膜片誘導(dǎo)培養(yǎng)基以構(gòu)建人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片,通過組織學染色以及掃描電鏡觀察細胞膜片的特性。取第3代人羊膜間充質(zhì)干細胞高密度接種于培養(yǎng)皿中,加入成膜片誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)7 d,再換用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)14 d以構(gòu)建成骨誘導(dǎo)的人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片。通過茜素紅染色、免疫組化染色、堿性磷酸酶活性、RT-PCR以及Westernblot檢測人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片的成骨分化潛能。結(jié)果與結(jié)論:①蘇木精-伊紅染色可見人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片由多層細胞累積而成,細胞分布均勻;②掃描電鏡觀察可見人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片呈復(fù)層結(jié)構(gòu),胞外有大量的胞外基質(zhì)產(chǎn)生,細胞包埋于胞外基質(zhì)中;③人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片成骨誘導(dǎo)14 d,茜素紅染色后可見橘紅色沉淀,免疫組化染色后細胞周圍有大量Ⅰ型膠原產(chǎn)... 

【文章來源】：中國組織工程研究. 2020,24(25)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片組織學觀察及掃描電鏡檢測

成骨誘導(dǎo)人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片茜素紅染色、免疫組化染色及堿性磷酸酶活性定量檢測

圖3 成骨誘導(dǎo)人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片茜素紅染色、免疫組化染色及堿性磷酸酶活性定量檢測實驗成功構(gòu)建了人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片，但是獲取的細胞膜片是否具有成骨分化潛能，對于組織工程骨的構(gòu)建至關(guān)重要。該實驗利用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片，培養(yǎng)14 d后堿性磷酸酶活性明顯增高；茜素紅染色結(jié)果顯示細胞外基質(zhì)中有橘紅色的結(jié)節(jié)產(chǎn)生；免疫組化結(jié)果顯示細胞周圍有大量Ⅰ型膠原產(chǎn)生；RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示Ⅰ型膠原、骨鈣蛋白以及Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄子2的mRNA水平及其蛋白表達明顯增高，差異有顯著性意義(P<0.05)，表明誘導(dǎo)的人羊膜間充質(zhì)干細胞膜片具有良好的成骨分化潛能。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]同種異體骨移植與自體骨移植修復(fù)四肢粉碎性骨折:骨性愈合及骨活性比較[J]. 杜輝,付勤.  中國組織工程研究. 2015(08)
[2]Cell sheet technology for regeneration of esophageal mucosa[J]. Ryo Takagi,Masayuki Yamato,Nobuo Kanai,Daisuke Murakami,Makoto Kondo,Takaaki Ishii,Takeshi Ohki,Hideo Namiki,Masakazu Yamamoto,Teruo Okano.  World Journal of Gastroenterology. 2012(37)



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