為提高人源化的抗B細(xì)胞成熟抗原（B-cell maturation antigen,BCMA）單鏈抗體（scFv）的親和力,本研究通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬初步探索其體外親和力成熟的關(guān)鍵位點(diǎn).首先利用ELISA檢測(cè)噬菌體表面展示的抗BCMA的親本單鏈抗體的結(jié)合活性,再通過(guò)同源模建搭建抗原-抗體復(fù)合三維結(jié)構(gòu),分析抗原-抗體間的相互作用,保留其互作界面處的關(guān)鍵殘基,以增加其相互作用為目標(biāo)而設(shè)計(jì)突變體,并利用重疊延伸PCR對(duì)scFv進(jìn)行定點(diǎn)突變以構(gòu)建突變體質(zhì)粒,最后通過(guò)ELISA初步檢測(cè)突變體的結(jié)合活性.結(jié)果顯示:噬菌體表面展示的抗BCMA的親本scFv具有結(jié)合抗原BCMA的活性,抗原-抗體間的非鍵相互作用主要為氫鍵和疏水相互作用,為增加抗原-抗體靜電相互作用而設(shè)計(jì)了3株突變體,但根據(jù)ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示靜電相互作用并不是決定scFv和BCMA結(jié)合的關(guān)鍵因素,通過(guò)創(chuàng)造額外的靜電作用,未能明顯提高scFv的親和力.通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬構(gòu)建了抗原-抗體復(fù)合物結(jié)構(gòu)模型,確定了其親和力成熟中應(yīng)保留的關(guān)鍵位點(diǎn),并發(fā)現(xiàn)靜電作用并不是決定scFv與抗原親和力的關(guān)鍵作用,推測(cè)氫鍵或其他作用力可能對(duì)親和力的提高作用更大,為后... 

【文章來(lái)源】：昆明理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,45(04)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

質(zhì)粒的構(gòu)建及anti-BCMA的scFv的ELISA檢測(cè)

以抗原BCMA與人鼠嵌合抗體(J22.9-xi)的復(fù)合晶體結(jié)構(gòu)(PDB ID:4ZFO)為模板,利用Prime軟件通過(guò)同源模建的方法搭建抗原BCMA與單鏈抗體scFv的復(fù)合三維結(jié)構(gòu),并使用OPLS3力場(chǎng)對(duì)搭建的BCMA-scFv復(fù)合三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行能量?jī)?yōu)化,消除原子間的疊合,獲得合理的復(fù)合物模擬結(jié)構(gòu).如圖2a所示為抗BCMA 的scFv的骨架式三維構(gòu)象,圖2b為抗原BCMA與scFv結(jié)合的穩(wěn)定復(fù)合物飄帶模型,其左側(cè)是抗原BCMA的晶體結(jié)構(gòu),右側(cè)是scFv的模擬結(jié)構(gòu).2.3 分析抗原-抗體結(jié)合表面選定突變位點(diǎn)

利用DS軟件分析該復(fù)合物模型中的非鍵相互作用,并用LigPlot軟件繪制抗原-抗體間的相互作用(見(jiàn)圖3),綜合分析發(fā)現(xiàn)scFv與BCMA的非鍵相互作用主要為氫鍵和疏水相互作用,其抗體中的Trp33、Tyr232、Ser193參與了氫鍵的形成,其余位點(diǎn)Ile101、Trp105、Tyr191、Trp237均與抗原BCMA存在疏水相互作用,這些位點(diǎn)都是scFv與BCMA相結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn),因此,在突變的過(guò)程中因保留這些位點(diǎn),以維持原有的結(jié)合活力.2.3.2 突變位點(diǎn)的選定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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