發(fā)布時間：2021-04-21 07:19

　　人柯薩奇病毒B組2型（CV-B2）作為一個引起的兒童手足口�。℉FMD）的病原體之一,流行病學(xué)研究證明CV-B2在人群中感染可能會引起重癥病例,但相關(guān)的致病機(jī)理依然處于探索階段,目前尚無針對CV-B2的有效藥物或疫苗,因此建立合適的動物模型對于深入開展基礎(chǔ)研究、疫苗研發(fā)與藥物研究具有重要意義。本論文首先對CV-B2細(xì)胞基質(zhì)及檢測方法的建立進(jìn)行摸索;之后選用與人類較為接近的非人靈長類動物（恒河猴）作為研究對象,構(gòu)建CV-B2感染的動物模型,對感染模型臨床表征、血液生化、排毒情況、組織病理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及免疫學(xué)指標(biāo)等進(jìn)行初步研究,探索病毒與宿主之間不同層次的相互作用,為闡明病毒的感染機(jī)制、檢測方法建立、靈長類動物模型評價等提供理論依據(jù),以期為CV-B2后續(xù)開展其感染機(jī)制、疫苗研發(fā)、標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建及動物模型評價等提供數(shù)據(jù)支持。本研究第一部分建立CV-B2病毒培養(yǎng)體系及檢測方法。方法將病毒接種于Vero細(xì)胞,按不同時間點(diǎn)收集病毒感染樣品,采用微量滴定法測定病毒感染性滴度,繪制病毒感染Vero的增殖動力學(xué)曲線;用含有T7啟動子的VP1基因與T載體連接后,經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄獲得RNA標(biāo)準(zhǔn)品。利用標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 CV-B2病毒培養(yǎng)及檢測方法建立
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 病毒
        1.2 細(xì)胞系
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑和耗材
        1.4 引物
        1.5 實(shí)驗(yàn)設(shè)備儀器
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 CV-B2病毒的培養(yǎng)、滴度和增殖動力學(xué)測定
        2.3 q-RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)品的制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    3. 結(jié)果
        3.1 CV-B2在Vero的病變情況
        3.2 CV-B2感染Vero的增殖動力學(xué)曲線
        3.3 q-RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線
    4. 討論
        4.1 CV-B2病毒生長曲線
        4.2 CV-B2核酸檢測方法
    5 小結(jié)
第二部分 CV-B2恒河猴嬰猴感染模型的構(gòu)建
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        1.3 引物
        1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備儀器
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 動物編號
        2.2 動物感染劑量及方式
        2.3 實(shí)驗(yàn)觀察及體溫監(jiān)測
        2.4 樣品采集及處理
        2.5 血細(xì)胞及生化檢測
        2.6 樣品病毒核酸檢測
        2.7 病理檢查
        2.8 免疫學(xué)研究
        2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3. 結(jié)果
        3.1 CV-B2感染恒河猴的臨床癥狀
        3.2 CV-B2感染恒河猴的體溫監(jiān)測
        3.3 CV-B2感染恒河猴的血細(xì)胞變化
        3.4 CV-B2感染恒河猴的生化指標(biāo)變化
        3.5 CV-B2感染恒河猴的樣品病毒核酸檢測
        3.6 CV-B2感染恒河猴的組織病理分析
        3.7 CV-B2感染恒河猴的免疫學(xué)指標(biāo)變化
    4. 討論
        4.1 臨床癥狀
        4.2 糞便、咽拭子、血液、組織中的病毒載量
        4.3 組織浸染和病理改變
        4.4 免疫反應(yīng)
    5. 小結(jié)
    6. 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄一 主要縮略詞表
    附錄二 主要溶液的和培養(yǎng)基的配置
    附錄三 流式細(xì)胞亞群分析
    附錄四 組織實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)
研究生簡歷
研究生在讀期間發(fā)表論文（含并列第一作者）
致謝



本文編號：3151326