目的構(gòu)建表達(dá)甲型H5N1禽流感病毒（H5N1 avian influenza A virus,H5N1 AIAV）NIBRG14株結(jié)構(gòu)蛋白的重組痘苗病毒,為研制新型人用流感疫苗奠定基礎(chǔ)。方法通過反轉(zhuǎn)錄PCR擴增H5N1 AIAV NIBRG14株的血凝素（hemagglutinin,HA）和神經(jīng)氨酸酶（neuraminidase,NA）編碼基因,并將改造的HA、NA基因克隆至痘苗病毒穿梭質(zhì)粒pSCCK。在重組質(zhì)粒與痘苗病毒天壇株（vaccinia virus Tiantan,VTT）于Vero細(xì)胞中發(fā)生同源重組后,篩選同時表達(dá)HA和NA的重組痘苗病毒（rVTT-HA/NA）,并對其進(jìn)行鑒定。結(jié)果反轉(zhuǎn)錄PCR擴增的HA和NA基因大小約分別為1 700和1 400 bp,與預(yù)期相同。DNA測序證實,改造的HA和NA序列正確。對獲得的rVTT-HA/NA進(jìn)行PCR及測序表明,HA和NA基因正確插入VTT。蛋白質(zhì)印跡顯示,rVTT-HA/NA感染的Vero細(xì)胞表達(dá)的HA和NA能與相應(yīng)的抗體發(fā)生反應(yīng)。表達(dá)的HA具有血凝活性,血凝滴度為1∶32。結(jié)論重組痘苗病毒rVTT-HA/NA可穩(wěn)定表達(dá)H5N... 

【文章來源】：國際生物制品學(xué)雜志. 2020,43(03)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]八聯(lián)重組痘苗病毒天壇株的構(gòu)建及篩選[D]. 王宏宇.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：3142215