目的基于轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)探討腸道病毒71型（EV71）感染對人橫紋肌肉瘤（RD）細胞自噬和免疫的影響及其作用機制。方法用不同劑量EV71感染RD細胞確定感染復數(shù)（MOI）。在MOI=1時選擇不同時間點（0、0.5、1、1.5、3、6、9和12 h）共8組進行后續(xù)實驗。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)和數(shù)量變化;蛋白免疫印跡（Western blot）檢測蛋白表達情況;運用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)分析細胞功能及基因表達的變化;高內(nèi)涵細胞成像技術(shù)觀察細胞內(nèi)蛋白表達情況。結(jié)果倒置顯微鏡可見細胞在病毒感染3 h由梭形貼壁逐漸變?yōu)閳A形懸浮,細胞數(shù)量相比0 h明顯減少（P<0.05）。Western blot結(jié)果顯示細胞在感染后6 h、9 h、12 h,病毒在RD細胞內(nèi)已經(jīng)表達病毒衣殼蛋白1（VP-1）,感染后9 h自噬相關(guān)蛋白LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ與0 h組相比明顯升高（P<0.01）。轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果顯示EV71感染RD細胞后3 h細胞內(nèi)基因表達變化達到峰值,上調(diào)基因1 199個,下調(diào)基因126個。KEGG分析提示改變的信號通路分子大多與自噬和免疫相關(guān)。高內(nèi)涵細胞成像顯示細胞在感染后數(shù)量減少,細胞內(nèi)自噬蛋... 

【文章來源】：天津醫(yī)藥. 2020,48(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

不同時間EV71感染RD細胞形態(tài)和數(shù)量變化

高內(nèi)涵細胞成像結(jié)果顯示，RD細胞在感染后細胞數(shù)量明顯減少，病毒感染引起細胞產(chǎn)生病變和死亡。但細胞內(nèi)平均熒光強度明顯增加，隨著病毒進入細胞，引起細胞內(nèi)自噬蛋白Atg5(F=3.719,P<0.05）、Rictor(F=3.588,P<0.05）表達上調(diào)，見圖5。圖4 GO富集和KEGG信號通路分析EV71感染RD細胞3 h后基因差異表達

GO富集和KEGG信號通路分析EV71感染RD細胞3 h后基因差異表達

【參考文獻】：
期刊論文
[1]金黃色葡萄球菌通過TLR2/PI3K信號誘導巨噬細胞的炎癥反應和自噬[J]. 李帥,方磊,王炯,劉榮玉.  細胞與分子免疫學雜志. 2017(09)
[2]EV71的感染和抗病毒天然免疫應答[J]. 謝廣成,段招軍.  病毒學報. 2016(04)



本文編號：3139419