目的基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)探討腸道病毒71型（EV71）感染對(duì)人橫紋肌肉瘤（RD）細(xì)胞自噬和免疫的影響及其作用機(jī)制。方法用不同劑量EV71感染RD細(xì)胞確定感染復(fù)數(shù)（MOI）。在MOI=1時(shí)選擇不同時(shí)間點(diǎn)（0、0.5、1、1.5、3、6、9和12 h）共8組進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量變化;蛋白免疫印跡（Western blot）檢測(cè)蛋白表達(dá)情況;運(yùn)用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)分析細(xì)胞功能及基因表達(dá)的變化;高內(nèi)涵細(xì)胞成像技術(shù)觀察細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)情況。結(jié)果倒置顯微鏡可見細(xì)胞在病毒感染3 h由梭形貼壁逐漸變?yōu)閳A形懸浮,細(xì)胞數(shù)量相比0 h明顯減少（P<0.05）。Western blot結(jié)果顯示細(xì)胞在感染后6 h、9 h、12 h,病毒在RD細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)表達(dá)病毒衣殼蛋白1（VP-1）,感染后9 h自噬相關(guān)蛋白LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ與0 h組相比明顯升高（P<0.01）。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果顯示EV71感染RD細(xì)胞后3 h細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)變化達(dá)到峰值,上調(diào)基因1 199個(gè),下調(diào)基因126個(gè)。KEGG分析提示改變的信號(hào)通路分子大多與自噬和免疫相關(guān)。高內(nèi)涵細(xì)胞成像顯示細(xì)胞在感染后數(shù)量減少,細(xì)胞內(nèi)自噬蛋... 

【文章來源】：天津醫(yī)藥. 2020,48(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

不同時(shí)間EV71感染RD細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量變化

高內(nèi)涵細(xì)胞成像結(jié)果顯示，RD細(xì)胞在感染后細(xì)胞數(shù)量明顯減少，病毒感染引起細(xì)胞產(chǎn)生病變和死亡。但細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度明顯增加，隨著病毒進(jìn)入細(xì)胞，引起細(xì)胞內(nèi)自噬蛋白Atg5(F=3.719,P<0.05）、Rictor(F=3.588,P<0.05）表達(dá)上調(diào)，見圖5。圖4 GO富集和KEGG信號(hào)通路分析EV71感染RD細(xì)胞3 h后基因差異表達(dá)

GO富集和KEGG信號(hào)通路分析EV71感染RD細(xì)胞3 h后基因差異表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]金黃色葡萄球菌通過TLR2/PI3K信號(hào)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和自噬[J]. 李帥,方磊,王炯,劉榮玉.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2017(09)
[2]EV71的感染和抗病毒天然免疫應(yīng)答[J]. 謝廣成,段招軍.  病毒學(xué)報(bào). 2016(04)



本文編號(hào)：3139419