本研究旨在探討細(xì)胞自噬對(duì)犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（cBMSCs）干性的影響。分離培養(yǎng)cBMSCs,將其分為對(duì)照組、使用雷帕霉素促進(jìn)細(xì)胞自噬的雷帕霉素組、使用3-MA抑制細(xì)胞自噬的3-MA組,于藥物處理12、24、48 h后收集細(xì)胞,利用間接細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)自噬微管相關(guān)蛋白1輕鏈3Ⅱ（LC 3Ⅱ）的蛋白表達(dá)水平;熒光定量PCR檢測(cè)自噬相關(guān)基因LC 3、Beclin 1、自噬相關(guān)基因7（Atg 7）以及干性相關(guān)基因性別決定基因相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Sox 2）、特異AT序列結(jié)合蛋白2（Satb 2） mRNA轉(zhuǎn)錄水平;通過(guò)茜素紅染色檢測(cè)經(jīng)成骨誘導(dǎo)的cBMSCs的成骨分化能力,通過(guò)油紅O染色檢測(cè)經(jīng)成脂誘導(dǎo)的cBMSCs的成脂分化能力。結(jié)果顯示:雷帕霉素組的LC 3Ⅱ蛋白表達(dá)量上調(diào),3-MA組則為下調(diào)。雷帕霉素組干性相關(guān)基因與自噬相關(guān)基因在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平均有不同程度的上調(diào),且隨感染時(shí)間的延長(zhǎng)呈上調(diào)趨勢(shì);3-MA組干性相關(guān)基因與自噬相關(guān)基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平在不同時(shí)間點(diǎn)不同程度降低,且隨感染時(shí)間延長(zhǎng)呈下調(diào)趨勢(shì)。成骨誘導(dǎo)試驗(yàn)中雷帕霉素組cBMSCs形態(tài)變化最明顯,且礦化面積較大,3-MA組細(xì)胞礦化面積... 

【文章來(lái)源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,51(02)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

成脂誘導(dǎo)試驗(yàn)(油紅O染色,100×)

表1 熒光定量PCR引物序列Table 1 Realtime fluorescence quantitative PCR primers sequences 基因Genes 引物序列(5′→3′)Primer sequence 退火溫度/℃Tm Beclin 1 F:GCTGCCGTTATATTGTTCTGR:TGCCTCCTGTGTCTTCAA 60 LC 3 F:CCTGTCCTGGATAAGACCAAGTTR:CTCCTGTTCATAGATGTCAGCGAT 60 Atg 7 F:TTGATGTGTTGGAGATTGGTR:AGGATTGGAGTAGGAGATATTG 60 Sox 2 F:AGTCTCCAAGCGACGAAAAAR:GCAAGAAGCCTCTCCTTGAA 60 Satb 2 F:CTTTGCAAGAGTGGCATTCAR:ATGCTCACATTGGGGTTCAT 60 GAPDH R: TGACACCCACTCTTCCACCTTCR:ATGAGGTCCACCACCCGGTTGCTGT 58圖2 各組cBMSCs形態(tài)觀察(400×)

各組cBMSCs形態(tài)觀察(400×)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3139063