Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV,是一種蜱傳的新型布尼亞病毒,于中國大別山地區(qū)被首次發(fā)現(xiàn),臨床上可以引起嚴(yán)重發(fā)熱、血小板減少癥狀,致死率可達(dá)30%。自發(fā)現(xiàn)以來,中國已有26個省報道了SFTSV感染病例,這已成為公共衛(wèi)生的重要威脅。由于SFTSV的致病機(jī)制和感染相關(guān)的宿主細(xì)胞因子尚不清楚,目前還沒有針對該病毒的特效藥物和疫苗。CRISPR/Cas9系統(tǒng)由于具有高效、穩(wěn)定、操作簡單的特點(diǎn),目前已經(jīng)作為一種利器被廣泛應(yīng)用在動植物細(xì)胞的基因編輯上。近幾年,以CRISPR/Cas9為基礎(chǔ)的文庫篩選技術(shù)逐漸發(fā)展起來,并在篩選與病毒感染相關(guān)的宿主因子方面展現(xiàn)出了巨大潛力。針對丙肝病毒、登革病毒、日本腦炎病毒和西尼羅病毒,目前已經(jīng)篩選出了一批與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能以及受體相關(guān)的宿主因子;而對于其它病毒,比如HIV和流感病毒,目前也篩選出了一些與病毒進(jìn)入、唾液酸合成以及糖基化修飾通路相關(guān)的基因。然而,有關(guān)布尼亞病毒的宿主因子篩選的報道很少,因此與這類病毒感染相關(guān)的宿主基因和信號通路還不清楚。本研究利用以96孔板為基礎(chǔ)的陣列CRISPR文... 

【文章來源】：中國疾病預(yù)防控制中心北京市

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１細(xì)菌的ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)應(yīng)對外源ＤＮＡ的免疫機(jī)制（８）??

病毒、細(xì)菌等病原微生物感染相關(guān)宿主因子；??細(xì)胞癌變的相關(guān)基因；??細(xì)胞抗藥性相關(guān)的基因等。??Ｒ文庫篩選技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)??感染領(lǐng)域，陽性篩選應(yīng)用更為廣泛，但該方法要求篩選亡，且篩選時間不可過長，否則無法分辨細(xì)胞死亡的原是細(xì)胞本身衰老或者細(xì)胞密度太大引起；篩選后的存活增殖能力，能從單個細(xì)胞長成細(xì)胞團(tuán)或片狀，否則存活病毒的挑戰(zhàn)，但最終因?yàn)椴荒茉鲋扯幢缓Y選出來，這長。所以從篩選時間上講，上述兩點(diǎn)本身就具有矛盾，握好細(xì)胞密度和篩選時間，進(jìn)而造成不同實(shí)驗(yàn)者甚至不選結(jié)果一致性差，要么篩選出的基因太局限，不能反映這些基因在功能上不能定位于同一信號通路，而是相互

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀：ＴＣ２０?Ａｕｔｏｍａｔｅｄ?Ｃｅｌｌ?Ｃｏｕｎｔｅｒ，美國Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司生產(chǎn)??２．２技術(shù)路線??本部分的總體技術(shù)路線分為９６孔板篩選和混雜篩選兩部分，如圖３。??２１??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 陳怡李,姚書忠.  國際生殖健康/計(jì)劃生育雜志. 2017(06)
[2]基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)高通量篩選研究功能基因[J]. 王干誠,馬明,葉延幀,席建忠.  遺傳. 2016(05)
[3]囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合物Retromer和SNX蛋白家族在發(fā)育和疾病中的作用[J]. 宋硯澤,沈成豪,李雪,蘇立波,林鑫華,吳一卉.  中國科學(xué):生命科學(xué). 2016(01)
[4]CRISPR/Cas9基因組編輯技術(shù)在癌癥研究中的應(yīng)用[J]. 王大勇,馬寧,惠洋,高旭.  遺傳. 2016(01)
[5]CRISPR/Cas9系統(tǒng)的分子機(jī)制及其在人類疾病基因治療中的應(yīng)用[J]. 璩良,李華善,姜運(yùn)涵,董春升.  遺傳. 2015(10)
[6]CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)在病毒感染疾病治療中的應(yīng)用[J]. 殷利眷,胡斯奇,郭斐.  遺傳. 2015(05)
[7]高等動植物網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞[J]. 王超,潘建偉.  浙江師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2012(04)
[8]Rab家族及其在囊泡運(yùn)輸中的作用[J]. 管睿,崔英.  國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊. 2005(02)
[9]網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用機(jī)制[J]. 姚鵬程,葉恭銀.  生命科學(xué)研究. 2003(S1)
[10]網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的突觸囊泡內(nèi)吞機(jī)制[J]. 李穆豐,施玉.  中國神經(jīng)科學(xué)雜志. 2002(03)

博士論文
[1]SNX16和SNX11的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究[D]. 徐進(jìn)新.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2012
[2]SNX10，SNX11蛋白功能研究[D]. 吳斌.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2011

碩士論文
[1]重組SNX11蛋白PX結(jié)構(gòu)域的晶體學(xué)研究[D]. 許婷婷.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2011



本文編號：3136507