【目的】通過(guò)對(duì)布魯氏菌gntR基因進(jìn)行原核表達(dá),分析其誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的Th1和Th2型免疫反應(yīng)。【方法】以布魯氏菌S2308基因組為模板,根據(jù)GenBank上公布的S2308 gntR基因序列設(shè)計(jì)引物,利用分子克隆技術(shù),將gntR基因片段克隆至原核表達(dá)載體pET-30a,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞中,誘導(dǎo)GntR蛋白表達(dá);利用SDS-PAGE對(duì)GntR重組蛋白（rGntR）進(jìn)行分析;利用AKTAxpress智能多維純化系統(tǒng)對(duì)rGntR進(jìn)行純化;利用Western blotting分析其免疫反應(yīng)性;用rGntR刺激小鼠巨噬細(xì)胞RAW 264.7和小鼠脾細(xì)胞,利用ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5,以及IgG抗體的水平。將rGntR免疫小鼠,檢測(cè)小鼠血清中IFN-γ和IL-4的水平�！窘Y(jié)果】gntR基因大小為735 bp,編碼245個(gè)氨基酸,大約在35 kDa處出現(xiàn)蛋白條帶,純化后為單一條帶。WB顯示,rGntR具有較好的免疫反應(yīng)性。rGntR可誘導(dǎo)宿主細(xì)胞和小鼠產(chǎn)生較高水平的IFN-γ、IL-4和IgG�！窘Y(jié)論】rGntR可在體內(nèi)或體外誘導(dǎo)輔助性T細(xì)... 

【文章來(lái)源】：微生物學(xué)報(bào). 2020,60(04)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【部分圖文】：

rGntR的表達(dá)、純化與Western blotting分析

rGntR刺激RAW 264.7細(xì)胞后IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5的水平檢測(cè)

為了檢測(cè)rGntR誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)，用rGntR免疫BALB/c小鼠后35 d，無(wú)菌分離脾細(xì)胞，檢測(cè)脾細(xì)胞中Th1型細(xì)胞因子IFN-γ和Th2型細(xì)胞因子IL-4的水平。免疫小鼠的脾細(xì)胞用S2308裂解物、Con A(陽(yáng)性對(duì)照)或RPMI 1640(陰性對(duì)照)進(jìn)行刺激。當(dāng)用熱滅活S2308刺激時(shí)，免疫rGntR小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ和IL-4的水平顯著高于免疫PBS的小鼠(P<0.01)(圖4)；在所有組中，ConA刺激小鼠脾細(xì)胞后，均可產(chǎn)生較高水平的IFN-γ和IL-4；而RPMI 1640刺激的小鼠脾細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞因子產(chǎn)生，并且免疫PBS小鼠的脾細(xì)胞產(chǎn)生較低水平的細(xì)胞因子(圖4)，表明小鼠免疫rGntR后，可誘導(dǎo)Th1和Th2型細(xì)胞免疫反應(yīng)。圖4.rGntR免疫小鼠后小鼠脾細(xì)胞中IFN-γ和IL-4的水平檢測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]布魯氏菌L7/L12蛋白的基因克隆與原核表達(dá)[J]. 胡祥坤,盧天成,王巖,劉思陽(yáng),王秀然.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2019(07)
[2]羊種布氏桿菌M5-90 DnaK的原核表達(dá)及免疫保護(hù)性研究[J]. 張俊波,印雙紅,易繼海,張紅,方維煥,王嘉福,李志強(qiáng),陳創(chuàng)夫.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2018(08)



本文編號(hào)：3132377