目的建立一種新的敏感、特異且能快速檢測(cè)細(xì)粒棘球絳蟲G1的重組酶介導(dǎo)擴(kuò)增技術(shù)（Recombinase aided isothermal amplification, RAA）。方法以細(xì)粒棘球絳蟲G1（E.granulosus G1,EgG1）線粒體基因序列（GenBank No. AF297617）作為靶序列設(shè)計(jì)合成引物,以EgG1 DNA為模板進(jìn)行RAA擴(kuò)增,反應(yīng)產(chǎn)物預(yù)期大小為284 bp。以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）作為平行對(duì)照,應(yīng)用RAA擴(kuò)增不同稀釋濃度的基因組DNA及梯度稀釋的含目的基因片段不同拷貝數(shù)的pMD19-T（Simple）克隆質(zhì)粒,以評(píng)價(jià)RAA檢測(cè)方法的檢測(cè)靈敏度;應(yīng)用此方法檢測(cè)多房棘球絳蟲、牛帶絳蟲、亞洲帶絳蟲、多頭帶絳蟲、犬復(fù)孔絳蟲、犬弓首蛔蟲、毛首鞭形線蟲、賈第鞭毛蟲、肝片吸蟲、衛(wèi)氏并殖吸蟲、大片吸蟲以及華支睪吸蟲基因組DNA,以評(píng)價(jià)方法的特異性。方法優(yōu)化后用于檢測(cè)感染EgG1的動(dòng)物組織標(biāo)本（10份）、模擬現(xiàn)場(chǎng)陽(yáng)性犬糞標(biāo)本（3份）以及現(xiàn)場(chǎng)陽(yáng)性犬糞標(biāo)本（5份）,以驗(yàn)證該項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)的可靠性和實(shí)用性。結(jié)果建立的RAA法可在40 min內(nèi)特異性擴(kuò)增EgG1的目的基因片段,最... 

【文章來源】：中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2020,15(06)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

模擬陽(yáng)性犬糞RAA法與PCR檢測(cè)

犬糞RAA與PCR的盲測(cè)檢測(cè)

將獲取的細(xì)粒棘球絳蟲G1基因組DNA進(jìn)行RAA以及PCR鑒定。從圖1中看出,兩種擴(kuò)增方法均得到與預(yù)期大小一致的片段。序列分析表明擴(kuò)增片段均是目的基因片段。2 不同反應(yīng)時(shí)間的RAA擴(kuò)增結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]我國(guó)棘球蚴病疾病負(fù)擔(dān)分析[D]. 張夢(mèng)媛.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心 2017



本文編號(hào)：3118285