發(fā)布時間：2021-04-04 15:17

　　目的建立一種新的敏感、特異且能快速檢測細粒棘球絳蟲G1的重組酶介導(dǎo)擴增技術(shù)（Recombinase aided isothermal amplification, RAA）。方法以細粒棘球絳蟲G1（E.granulosus G1,EgG1）線粒體基因序列（GenBank No. AF297617）作為靶序列設(shè)計合成引物,以EgG1 DNA為模板進行RAA擴增,反應(yīng)產(chǎn)物預(yù)期大小為284 bp。以聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）作為平行對照,應(yīng)用RAA擴增不同稀釋濃度的基因組DNA及梯度稀釋的含目的基因片段不同拷貝數(shù)的pMD19-T（Simple）克隆質(zhì)粒,以評價RAA檢測方法的檢測靈敏度;應(yīng)用此方法檢測多房棘球絳蟲、牛帶絳蟲、亞洲帶絳蟲、多頭帶絳蟲、犬復(fù)孔絳蟲、犬弓首蛔蟲、毛首鞭形線蟲、賈第鞭毛蟲、肝片吸蟲、衛(wèi)氏并殖吸蟲、大片吸蟲以及華支睪吸蟲基因組DNA,以評價方法的特異性。方法優(yōu)化后用于檢測感染EgG1的動物組織標本（10份）、模擬現(xiàn)場陽性犬糞標本（3份）以及現(xiàn)場陽性犬糞標本（5份）,以驗證該項檢測技術(shù)的可靠性和實用性。結(jié)果建立的RAA法可在40 min內(nèi)特異性擴增EgG1的目的基因片段,最... 

【文章來源】：中國病原生物學(xué)雜志. 2020,15(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

模擬陽性犬糞RAA法與PCR檢測

犬糞RAA與PCR的盲測檢測

將獲取的細粒棘球絳蟲G1基因組DNA進行RAA以及PCR鑒定。從圖1中看出,兩種擴增方法均得到與預(yù)期大小一致的片段。序列分析表明擴增片段均是目的基因片段。2 不同反應(yīng)時間的RAA擴增結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3118285