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光遺傳調(diào)控SOCE通路誘導(dǎo)NFATcl與NFATc3活化在神經(jīng)祖細(xì)胞分化調(diào)控中作用機(jī)制的研究

發(fā)布時(shí)間:2021-04-04 12:32
  神經(jīng)祖細(xì)胞(Neural Progenitor Cell,NPCs)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central Nervous System,CNS)中一種特殊類型的專能干細(xì)胞,具有自我更新和定向分化為星型膠質(zhì)細(xì)胞(Astrocyte,Ast),少突膠質(zhì)細(xì)胞(Oligodendrocyte,OL)和神經(jīng)元(Neuron,Neo)的能力。NPCs不僅作為哺乳動(dòng)物CNS發(fā)育早期的神經(jīng)發(fā)生細(xì)胞,在成熟的CNS中,NPCs也可作為后備存儲(chǔ)細(xì)胞,少量的儲(chǔ)存在成體腦組織的特定區(qū)域內(nèi)。當(dāng)CNS受到損傷或疾病刺激而發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的細(xì)胞死亡和缺失后,NPCs被重新激活,參與細(xì)胞和組織的損傷修復(fù)過程;谶@種特性,臨床上已經(jīng)應(yīng)用體外培養(yǎng)的NPCs移植來治療CNS損傷。然而,在自然分化的條件下,僅有約15%的NPCs向Neo分化,約10%的NPCs向OL分化,絕大部分約75%的NPCs向Ast方向分化。在這種不平衡的分化比例下,不僅過多Ast會(huì)形成膠質(zhì)瘢痕而阻礙損傷的修復(fù),Neo和OL分化比例過低也會(huì)嚴(yán)重限制神經(jīng)功能的恢復(fù)。因此,如何誘導(dǎo)NPCs定向OL或者Neo分化目前NPCs研究領(lǐng)域中亟待解決的難題。研究發(fā)現(xiàn)NPCs... 

【文章來源】:中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】:87 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

光遺傳調(diào)控SOCE通路誘導(dǎo)NFATcl與NFATc3活化在神經(jīng)祖細(xì)胞分化調(diào)控中作用機(jī)制的研究


LeGO-iT2-IRES-tdTomato質(zhì)粒圖譜(#27343);B.LeGO-iT2-mCh-rLOVsoc重組質(zhì)粒

示意圖,蛋白,內(nèi)流,示意圖


陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文制:LeGO-iT2-mCh-rLOVsoc 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 NPCs 后,CCherry- LOV2404-546-rSTIM1336-486 蛋白,示意圖如1 蛋白與 LOV2 蛋白融合而不發(fā)揮功能。在脈沖式藍(lán)光刺激,40μW/mm2),誘導(dǎo) LOV2 感光素發(fā)生構(gòu)象改變TIM1 蛋白活化后與胞膜上的 Orai1 蛋白結(jié)合而形成 S

序列,質(zhì)粒,重組質(zhì)粒,長度


切后顯示與原始質(zhì)粒(陰性對(duì)照)相比,長度分別為 1227bp,848bp證質(zhì)粒序列是否構(gòu)建成功。測(cè)序起始顯示 sgRNA 特異性序列成功構(gòu)建到粒經(jīng)過慢病毒包裝后轉(zhuǎn)染 NPCs,轉(zhuǎn) 48 h 后,剩余細(xì)胞換新鮮培養(yǎng)基繼測(cè) NFATc1 與 NFATc3 蛋白的表達(dá)。P 0-3)SD 乳鼠,酒精消毒后斷勁處掉皮膚,另一組鑷子和箭頭剖開露 PBS 溶液中,在解剖顯微鏡下剝除腦片反復(fù)研磨直至無明顯組織塊存在濾網(wǎng)過濾出細(xì)胞懸液,1500 rpm,離

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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[2]活化的T細(xì)胞核內(nèi)因子(NFAT)的調(diào)節(jié)及其在神經(jīng)系統(tǒng)中的功能[J]. 孫越,趙艷娥,駱靜.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2014(07)
[3]STIM/SOCE通路參與細(xì)胞功能調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 馬騰,全弘宇,趙柏雄,李紅麗.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2014(05)
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[6]小鼠胚胎神經(jīng)干細(xì)胞的長期培養(yǎng)和分化[J]. 楊立業(yè),惠國楨,包大士,蔣麗珍,費(fèi)儉,郭禮和.  中華外科雜志. 2002(10)
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碩士論文
[1]姜黃素誘導(dǎo)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞促進(jìn)脊髓損傷后膠質(zhì)瘢痕重塑的研究[D]. 向鑫.第三軍醫(yī)大學(xué) 2014



本文編號(hào):3118037

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