目的分析斯氏按蚊肽聚糖識別蛋白PGRP-LB的序列,表達和純化PGRP-LB蛋白。方法采用生物信息學方法分析PGRP-LB蛋白的序列。以斯氏按蚊的cDNA為模板PCR擴增PGRP-LB,采用無縫克隆的方法將其克隆到原核表達載體pET28a中,然后轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌E.coli BL21（DE3）感受態(tài)細胞,利用異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）進行目的蛋白的誘導(dǎo)表達。SDS-PAGE凝膠電泳及考馬斯亮藍染色檢測PGRP-LB的表達情況。經(jīng)鎳離子親和層析純化后,Bradford法檢測洗脫液的濃度。通過MEGA7軟件構(gòu)建系統(tǒng)進化樹,進行PGRP-LB的進化分析。結(jié)果成功獲得pET28a-PGRP-LB的重組質(zhì)粒,37℃、0.5mmol/L的IPTG能誘導(dǎo)出大量的包涵體PGRP-LB重組蛋白,相對分子質(zhì)量約為26×103,純化后的蛋白濃度為0.5mg/ml。進化分析顯示,斯氏按蚊PGRP-LB與同科物種間親緣關(guān)系較近。結(jié)論成功使用大腸埃希菌原核表達系統(tǒng)表達斯氏按蚊PGRP-LB蛋白,為該蛋白在按蚊體內(nèi)的定位及功能研究奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國病原生物學雜志. 2020,15(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

斯氏按蚊和其他昆蟲的肽聚糖識別蛋白系統(tǒng)進化樹

斯氏按蚊PGRP-LB氨基酸序列比對

斯氏按蚊PGRP-LB基因擴增

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3083035