本文關(guān)鍵詞：UBE2O在c-Maf泛素化降解過(guò)程中的功能研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一章c-Maf泛素結(jié)合酶E2的發(fā)現(xiàn)目的:轉(zhuǎn)錄因子c-Maf可以發(fā)生多聚泛素化,但其具體的泛素化酶尚不清楚。本部分將尋找參與c-Maf泛素化修飾的泛素結(jié)合酶E2。方法:(1)利用免疫共沉淀方法,富集與c-Maf相互作用的蛋白質(zhì)。(2)通過(guò)SDS-PAGE凝膠電泳分離共沉淀的蛋白樣品,利用高靈敏度的考馬斯亮藍(lán)染色法對(duì)凝膠進(jìn)行染色。(3)利用LC-MS/MS技術(shù)分析蛋白樣品,最后通過(guò)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)E2。(4)發(fā)現(xiàn)的E2利用免疫共沉淀、免疫印跡等方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:(1)免疫共沉淀結(jié)合LC-MS/MS技術(shù)發(fā)現(xiàn)了參與c-Maf泛素-蛋白酶體降解過(guò)程的5個(gè)重要組分,包括泛素激活酶Uba1,泛素結(jié)合酶UBE2O以及三種泛素連接酶HUWE1、UBR5、HERC4。(2)UBE2O的質(zhì)譜結(jié)果與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)顯示,共沉淀的蛋白樣品中存在5條UBE2O的特異性肽段。(3)免疫共沉淀結(jié)合免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)UBE2O與c-Maf存在相互作用,并介導(dǎo)c-Maf的泛素化。結(jié)論:c-Maf存在泛素-蛋白酶體降解通路,并且UBE2O可能是c-Maf潛在的泛素結(jié)合酶。第二章UBE2O介導(dǎo)c-Maf蛋白泛素化的功能研究目的:探索UBE2O在c-Maf泛素-蛋白酶體降解過(guò)程中的作用及其機(jī)制。方法:(1)利用蛋白免疫印跡技術(shù)和放線菌酮測(cè)蛋白質(zhì)半衰期實(shí)驗(yàn)研究UBE2O對(duì)Maf蛋白表達(dá)穩(wěn)定性的影響。(2)利用熒光素酶活性檢測(cè)技術(shù)分析UBE2O對(duì)c-Maf轉(zhuǎn)錄活性的影響。(3)利用慢病毒介導(dǎo)技術(shù)探索UBE2O對(duì)內(nèi)源性c-Maf表達(dá)以及對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果:(1)UBE2O減弱了c-Maf和Maf B蛋白表達(dá)的穩(wěn)定性,但對(duì)Maf A的表達(dá)沒(méi)有顯著影響。(2)UBE2O影響了c-Maf對(duì)下游靶基因CCND2啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性。(3)過(guò)表達(dá)UBE2O促進(jìn)了內(nèi)源性c-Maf的降解,并誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的凋亡結(jié)論:UBE2O是c-Maf潛在的特異性泛素結(jié)合酶。
【關(guān)鍵詞】：c-Maf 泛素-蛋白酶體降解 LC-MS/MS UBE2O UBE2O c-Maf MafB MafA 泛素-蛋白酶體途徑 多發(fā)性骨髓瘤
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R3411
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-14
• 參考文獻(xiàn)11-14
• 第一章c-Maf泛素結(jié)合酶E2的發(fā)現(xiàn)14-32
• 前言14-15
• 材料和方法15-23
• 結(jié)果23-28
• 討論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 第二章 UBE2O介導(dǎo)c-Maf蛋白泛素化的功能研究32-47
• 前言32-33
• 材料和方法33-37
• 結(jié)果37-42
• 討論42-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 綜述：Maf家族蛋白在多發(fā)性骨髓瘤治療中的研究意義及其進(jìn)展47-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文59-60
• 中英文縮略詞匯表60-61
• 致謝61-62

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1 馬祖祥;趙維玲;李永柏;高曉潔;楊軍;孫平;李成榮;;特發(fā)性腎病綜合征患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞泛素的表達(dá)及意義[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2006年10期

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本文編號(hào)：307014