發(fā)布時(shí)間：2021-03-04 13:00

　　肌肉和肌腱不僅是人體肌肉骨骼系統(tǒng)中軟組織的重要組成部分,而且肌肉在代謝調(diào)控中發(fā)揮了無可替代的作用。慢性勞損、車禍、生活方式的改變等均會(huì)導(dǎo)致肌肉和肌腱發(fā)生病變,而目前臨床上對(duì)此并沒有很好的治療手段。作為營養(yǎng)代謝的關(guān)鍵信號(hào)分子,雷帕霉素靶蛋白mTOR通過介導(dǎo)蛋白質(zhì)合成參與調(diào)控骨骼肌的發(fā)育及再生修復(fù),但其上游調(diào)控分子尚不清楚。另一方面,目前對(duì)肌腱的研究主要集中于肌腱特異性轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控,而對(duì)mTOR信號(hào)是否在翻譯水平參與調(diào)控肌腱分化尚未有報(bào)道。因此,本論文針對(duì)mTOR信號(hào)通路在骨骼肌再生修復(fù)和肌腱分化過程中的作用及調(diào)控機(jī)制進(jìn)行以下兩部分的研究工作:第一部分,針對(duì)骨骼肌再生修復(fù)過程中,調(diào)控mTOR信號(hào)通路的上游信號(hào)分子進(jìn)行研究。mTOR信號(hào)通路作為代謝調(diào)控中的重要組成部分,在骨骼肌發(fā)育和再生修復(fù)中扮演了非常重要的角色。小G蛋白R(shí)ab5是內(nèi)體發(fā)生和運(yùn)輸?shù)闹饕{(diào)節(jié)者,但其體內(nèi)生理功能仍然未知。在本部分研究中,我們發(fā)現(xiàn)Rab5a蛋白在不同的體內(nèi)和體外肌生成模型中表達(dá)量明顯上調(diào),提示該分子參與肌肉生成。進(jìn)一步構(gòu)建肌肉特異性Rab5a敲除小鼠,發(fā)現(xiàn)和對(duì)照組小鼠相比,Rab5a的敲除導(dǎo)致小鼠骨骼肌再生修復(fù)... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：141 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２．１．１表達(dá)載體ＰＧＥＸ－４Ｔ－１的質(zhì)粒圖譜??１．２．１．４．２?ｐＸＪ４０真核表達(dá)載體??ＸＪ４０，立細(xì)

１．３．１?Ｒａｂ５ａ在成肌細(xì)胞分化和肌生成中特異性上調(diào)??Ｒａｂ５蛋白有Ｒａｂ５ａ，?Ｒａｂ５ｂ，?Ｒａｂ５ｃ三個(gè)亞型，其中Ｒａｂ５ａ是目前研究最多的??亞型。為了探究Ｒａｂ５在成肌細(xì)胞分化中的作用，我們在不同的體內(nèi)和體外的成肌??細(xì)胞分化系統(tǒng)中檢測了?Ｒａｂ５ａ蛋白的時(shí)空表達(dá)譜。在Ｃ２Ｃ１２小鼠成肌細(xì)胞系體外??分化系統(tǒng)中，當(dāng)把培養(yǎng)Ｃ２Ｃ１２成肌細(xì)胞的培養(yǎng)基從高糖培養(yǎng)基（ＧＭ）換成分化??培養(yǎng)基（ＤＭ）后，Ｃ２Ｃ１２成肌細(xì)胞會(huì)相互融合形成多核肌管。我們使用特異性抗??體檢測了?Ｃ２Ｃ１２成肌細(xì)胞分化中Ｒａｂ５ａ表達(dá)水平的變化。ＷＢ結(jié)果顯示，Ｒａｂ５ａ??表達(dá)量顯著升高，與成肌細(xì)胞分化的標(biāo)志性蛋白ＭｙｏＧ和肌球蛋白重鏈ＭＨＣ表達(dá)??上調(diào)一致（圖１．３．１Ａ）。同樣的，從脛骨前肌內(nèi)分離的初級(jí)成肌細(xì)胞在分化過程中，??檢測到Ｒａｂ５ａ蛋白的表達(dá)量也是明顯上調(diào)的（圖１．３．１Ｂ）。??Ｊ＼Ｃ２Ｃ１２?ｍｙｏｂｌａｓｔ?Ｑ?Ｐｒｉｍａｒｙ?ｍｙｏｂｌａｓｔ??

圖１．３．２早期分化的成肌細(xì)胞內(nèi)Ｒａｂ５的免疫熒光結(jié)果。??（Ａ）：將Ｃ２Ｃ１２細(xì)胞接種在蓋坡片上后換分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化３６小時(shí)。３％多聚??甲醛固定細(xì)胞。對(duì)內(nèi)源性Ｒａｂ５和帶綠色熒光標(biāo)記的二抗進(jìn)行免疫熒光染色。紅色??為細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白絲Ａｃｔｉｎ，藍(lán)色為細(xì)胞核。Ｂａｒ：?５０｜＿ｉｍ。（Ｂ）：將轉(zhuǎn)移至ＤＭ?１．５??天的Ｃ２Ｃ１２成肌細(xì)胞固定并與對(duì)內(nèi)源性Ｒａｂ５?（綠色）、ＭｙｏＧ?（紅色）進(jìn)行免疫熒??光染色。Ｈｏｅｃｈｓｔ染細(xì)胞核（藍(lán)色）。（Ｃ）：將轉(zhuǎn)移至ＤＭ?１．５天的Ｃ２Ｃ１２成肌細(xì)胞??固定并對(duì)內(nèi)源性Ｒａｂ７，?Ｒａｂ９或Ｒａｂｌｌ?（綠色）和ＭｙｏＧ?（紅色）進(jìn)行免疫熒光染??色，Ｈｏｅｃｈｓｔ染細(xì)胞核（藍(lán)色）。Ｂａｒ：?２０｜ｉｍ〇??Ｃ２Ｃ１２成肌細(xì)胞重塑后進(jìn)一步分化，表達(dá)早期分化的標(biāo)志性蛋白ＭｙｏＧ。免??熒光結(jié)果中ＭｙｏＧ高表達(dá)的細(xì)胞中Ｒａｂ５表迗量也是明顯增高的（圖１．３．２Ｂ）。??合圖１．３．１的結(jié)果，表明Ｒａｂ５ａ在成肌細(xì)胞分化過程中表達(dá)量顯著上調(diào)。Ｒａｂ家??。


本文編號(hào)：3063263