結核分枝桿菌感染導致的結核病仍然威脅著全球人類健康。由于多藥物耐受和廣泛耐藥結核分枝桿菌的出現(xiàn),尤其是HIV共感染,結核病的形勢極其嚴峻。結核分枝桿菌能夠通過多種機制逃逸宿主免疫系統(tǒng)是其作為成功病原菌的原因之一。從結核分枝桿菌基因組解密揭示了重要的信息,包括重要的PE/PPE蛋白家族。結核分枝桿菌PE/PPE家族蛋白是由PE和PPE亞家族構成,占結核分枝桿菌編碼能力的10%。PE亞家族是根據(jù)其N末端保守的P（Pro）-E（Glu）而命名,含有100個成員,具有由110個保守的氨基酸殘基編碼的N末端結構域,而其C末端序列長度大小不一,并富含GC核苷酸的重復序列PGRS。PE亞家族含有37個pe編碼基因和61個pe_pgrs基因。PPE亞家族是根據(jù)其N末端Pro（P）-Pro（P）-Glu（E）序列命名,包含69個成員,根據(jù)其C末端結構域特征主要分為三類PPE_SVP,PPE_PPW和PPE_MPTR亞家族。這些蛋白特有的序列可能暗示了它們在結核分枝桿菌感染中具有特殊的生理功能。PE/PPE家族蛋白幾乎只存在于... 

【文章來源】：西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻綜述
    1 結核病
    2 堪稱“分子魔杖”的結核分枝桿菌PE/PPE家族蛋白
    3 PE/PPE蛋白的分類
    4 PE/PPE蛋白結構特征
    5 PE/PPE家族蛋白的亞細胞定位
    6 PE/PPE蛋白的分泌
    7 PE/PPE蛋白的表達
        7.1 PE/PPE在胞外多種壓力條件下的差異表達
        7.2 胞內(nèi)感染條件下差異表達
    8 PE/PPE蛋白的調(diào)控
        8.1 Sigma因子
        8.2 擬核相關的全局性轉錄因子
        8.3 雙組份調(diào)控系統(tǒng)
        8.4 其他轉錄因子
    9 PE/PPE蛋白的功能
        9.1 參與分枝桿菌能量代謝
        9.2 PE/PPE蛋白促進分枝桿菌體外生長
        9.3 PE/PPE蛋白促進分枝桿菌在宿主體內(nèi)存活
        9.4 PE/PPE誘導宿主細胞死亡
        9.5 PE/PPE蛋白具有纖維蛋白結合功能
        9.6 PE/PPE蛋白干擾巨噬細胞功能
        9.7 PE/PPE蛋白影響抗原遞呈
        9.8 C末端結構域是抗原變異的來源
        9.9 其他功能
    10 PE/PPE蛋白調(diào)控宿主免疫反應
        10.1 PE/PPE蛋白調(diào)控宿主天然免疫反應
        10.2 PE/PPE蛋白調(diào)控宿主體液反應
    11 PE/PPE蛋白作為疫苗靶標和分子診斷標記
        11.1 PE/PPE蛋白作為診斷標記
        11.2 PE/PPE蛋白作為疫苗靶標
    參考文獻
第2章 緒論
    1 選題依據(jù)、研究目的與意義
    2 科學問題
    3 研究內(nèi)容與技術路線
    4 本文創(chuàng)新點
    5 本文不足之處
第3章 結核分枝桿菌PE亞家族蛋白PE11（Rv1169c）的功能研究
    1 引言
    2 實驗材料
        2.1 實驗質(zhì)粒、菌株與細胞系
        2.2 主要試劑
        2.3 主要培養(yǎng)基
        2.4 主要溶液
        2.5 主要儀器
    3 實驗方法
        3.1 構建表達Rv1169c基因的重組恥垢分枝桿菌
        3.2 分析Rv1169c在恥垢分枝桿菌中的表達
        3.3 重組恥垢分枝桿菌的亞細胞定位分析
        3.4 重組恥垢分枝桿菌脂肪酸測定
        3.5 體外分析重組恥垢分枝桿菌在不同壓力條件下的生存能力
        3.6 重組恥垢分枝桿菌對抗結核藥物敏感性分析
        3.7 重組恥垢分枝桿菌在巨噬細胞內(nèi)存活分析
        3.8 重組恥垢分枝桿菌對巨噬細胞活力的影響
        3.9 利用熒光定量RT-PCR和ELISA對細胞因子表達的分析
    4 實驗結果與分析
        4.1 Rv1169c成功表達于恥垢分枝桿菌
        4.2 Rv1169c蛋白定位于恥垢分枝桿菌細胞壁
        4.3 Rv1169c改變恥垢分枝桿菌細胞壁脂肪酸組分
        4.4 Rv1169c促使恥垢分枝桿菌對抗生素高度敏感
        4.5 Rv1169c減弱重組恥垢分枝桿菌的抗壓能力
        4.6 Rv1169c增加恥垢分枝桿菌在巨噬細胞內(nèi)存活
        4.7 Rv1169c促進巨噬細胞的死亡
        4.8 Rv1169c選擇性調(diào)控外周促炎細胞因子IL-6 分泌
    5 結果與討論
    6 實驗小結
    參考文獻
第4章 結核分枝桿菌PPE亞家族蛋白Rv1808在宿主信號傳遞中的作用
    1 引言
    2 實驗材料
        2.1 蛋白純化與復性相關試劑
        2.2 Pull-down實驗相關
        2.3 ELISA相關試劑
        2.4 MTT實驗相關
    3 實驗方法
        3.1 rRv1808蛋白的表達與純化
        3.2 重組恥垢分枝桿菌構建與鑒定
        3.3 重組恥垢分枝桿菌亞細胞結構的分離與鑒定
        3.4 Pull-down實驗分析
        3.5 細胞因子檢測
        3.6 細胞信號通路分析
Rv1808侵染U937巨噬細胞后的存活率檢測">        3.7 Ms_Rv1808侵染U937巨噬細胞后的存活率檢測
        3.8 MTT測定巨噬細胞活力
        3.9 LDH測定
    4 結果與分析
        4.1 rRv1808蛋白的表達與純化
        4.2 rRv1808表達于分枝桿菌細胞壁
        4.3 rRv1808與TLR2相互作用
        4.4 rRv1808蛋白促進細胞因子分泌
        4.5 rRv1808特異性促進細胞因子分泌
        4.6 rRv1808通過MAPKs和NF-κB信號通路促進TNF-α,IL-6 和IL-10的分泌
        4.7 Rv1808促進恥垢分枝桿菌在巨噬細胞內(nèi)生存
        4.8 MTT證明rRv1808蛋白影響巨噬細胞生存能力
        4.9 LDH證明rRv1808不影響細胞裂解
    5 討論
    參考文獻
附錄
致謝
在學期間發(fā)表的論文
在學期間參加的課題


【參考文獻】：
期刊論文
[1]結核分枝桿菌Rv1168c蛋白的基因表達、純化及結構分析[J]. 余曉麗,孫戰(zhàn)強,周晨俊,溫子祿,陳軍,孫慶文,王洪海,張舒林.  微生物學報. 2010(07)



本文編號：3037718