為了制備重組抗A型肉毒毒素（botulinum neurotoxin A,BoNT/A）人鼠嵌合單克隆抗體并分析中和活性,以BoNT/A作為抗原篩選鼠源抗BoNT/A噬菌體單鏈抗體庫(kù),將篩選得到的鼠源抗BoNT/A特異性單鏈抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)分別克隆到pGP5KCγ和pGP5KCκ載體構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒。表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK-293EBNA1細(xì)胞,瞬時(shí)表達(dá)抗BoNT/A人鼠嵌合單克隆抗體（monoclonal antibody,mAb）。蛋白A親和純化mAb,分子排阻高效液相色譜（size exclusion high performance liquid chromatography,SEC-HPLC）分析mAb純度,小鼠中和試驗(yàn)評(píng)價(jià)mAb中和活性。結(jié)果顯示,經(jīng)過篩選得到4個(gè)序列正確且各不相同的抗BoNT/A單鏈抗體。4個(gè)抗BoNT/A人鼠嵌合mAb表達(dá)質(zhì)粒均構(gòu)建成功并轉(zhuǎn)染HEK-293EBNA1細(xì)胞,根據(jù)轉(zhuǎn)染效率指示綠色熒光蛋白的表達(dá)推測(cè),50%～62. 5%的細(xì)胞表達(dá)抗BoNT/A抗體。表達(dá)上清經(jīng)過蛋白A親和純化,濃度均>200μg/mL,單體純度均>90%。小鼠中和試... 

【文章來源】：生物資源. 2020,42(04)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

抗BoNT/A人鼠嵌合抗體聯(lián)用中和活性

pGP5KCγ‐VH、pGP5KCκ‐VL及pGP5GFPq三種質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK‐293EBNA1細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后24 h熒光顯微鏡下觀察4個(gè)抗BoNT/A mAb綠色熒光蛋白表達(dá)情況（圖2）。轉(zhuǎn)染效率指示pGP5GFPq質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染量為抗體表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染量的1/50，熒光顯微鏡下觀察到大約1%～1.25%的細(xì)胞有綠色熒光蛋白表達(dá)，則推測(cè)50%～62.5%的細(xì)胞表達(dá)抗BoNT/A抗體。2.4 抗BoNT/A人鼠嵌合抗體的純化

SEC‐HPLC將純化的抗BoNT/A抗體的聚體、單體及不完全分子片段有效地分離（圖4）。面積歸一化積分顯示，4個(gè)抗BoNT/A人鼠嵌合抗體的單體純度均大于90%。2.6 A型肉毒毒素毒力

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人源抗狂犬病病毒單克隆抗體的構(gòu)建及驗(yàn)證[J]. 房世娣,趙曉瑞,陳繼軍,安晨,南建軍,毛曉燕.  微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2019(04)
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[3]鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌體單鏈抗體庫(kù)的構(gòu)建及篩選[J]. 秦海艷,王建鋒,熊穎,盧衛(wèi)嘉,張超,毛曉燕.  生物技術(shù)通訊. 2015(01)

博士論文
[1]A型肉毒毒素受體和中和抗體研究[D]. 韋娜.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2011



本文編號(hào)：3036930