目的:探討EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）感染對(duì)MUS81（methl methanesulfonate and UV sensitive isolate number 81,對(duì)乙烷磺酸鹽及紫外線敏感的第81號(hào)獨(dú)立序列）表達(dá)的影響,研究MUS81基因在EBVaGC發(fā)生中的作用和作用機(jī)制。方法:（1）采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real time quantitative PCR,qRT-PCR）檢測(cè)EBV陽性胃癌細(xì)胞系和EBV陰性胃癌細(xì)胞系中MUS81、EME2（essential meiotic structure-specific endonuclease subunit 2,必需減數(shù)分裂結(jié)構(gòu)-特異性內(nèi)切酶亞基2）及其相關(guān)基因在轉(zhuǎn)錄水平上的差異;（2）Western blot技術(shù)檢測(cè)兩種細(xì)胞系中MUS81和EME2蛋白表達(dá)的差異;（3）分別構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染EBV潛伏膜蛋白1（Latent membrane protein1,LMP1）、潛伏膜蛋白2A（Latent membrane protein 2A,LMP2A）、EBV編碼小RNA（Epstein-Barr... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1.1 儀器、試劑和耗材
        1.1.1 主要儀器
        1.1.2 主要試劑和耗材
        1.1.3 常用液體的配制
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.1 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
        1.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇
        1.2.3 培養(yǎng)液更換
        1.2.4 細(xì)胞傳代
        1.2.5 去甲基化藥物處理細(xì)胞
    1.3 基因甲基化狀態(tài)檢測(cè)
        1.3.1 NA的提取
        1.3.2 NA樣本的重亞硫酸鹽處理
        1.3.3 甲基化特異性PCR（BGS）
    1.4 MUS81 及相關(guān)基因mRNA檢測(cè)
        1.4.1 RNA的提取
        1.4.2 去g NA處理
        1.4.3 逆轉(zhuǎn)錄合成c NA
        1.4.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    1.5 MUS81 及相關(guān)基因蛋白檢測(cè)
        1.5.1 蛋白質(zhì)的提取
        1.5.2 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定
        1.5.3 Western blot檢測(cè)目的基因的表達(dá)
        1.5.4 免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MUS81 蛋白表達(dá)
    1.6 細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)
        1.6.1 siRNA靶向沉默
        1.6.2 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        1.6.3 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
結(jié)果
    2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)MUS81 及其相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)
    2.2 Western blot檢測(cè)MUS81和EME2 蛋白表達(dá)
    2.3 外源性LMP1、LMP2A和 EBER對(duì) MUS81 表達(dá)的影響
    2.4 MUS81啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)檢測(cè)結(jié)果
    2.5 去甲基化藥物處理對(duì) MUS81 基因轉(zhuǎn)錄的影響
    2.6 去甲基化藥物處理對(duì) MUS81 蛋白表達(dá)的變化
    2.7 LMP1 對(duì) MUS81 轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響
    2.8 MUS81和EME2 基因?qū)?xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響
        2.8.1 檢測(cè)siMUS81和siEME2 的沉默效率
        2.8.2 MUS81和EME2 表達(dá)沉默對(duì)SGC7901 細(xì)胞系細(xì)胞周期和凋亡的影響
    2.9 胃癌組織中MUS81 蛋白的表達(dá)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的學(xué)術(shù)成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Mus81對(duì)人乳腺癌SKBR3增殖、侵襲和遷移的影響[J]. 吳云路,錢穎,呂娟,嚴(yán)秋月,董學(xué)君.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2014(10)
[2]EB病毒LMP1在腫瘤研究中的進(jìn)展[J]. 唐微,朱建思.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2012(07)



本文編號(hào)：3035045