目的·構(gòu)建白念珠菌ERG3基因敲除株,分析ERG3敲除對(duì)白念珠菌唑類(lèi)藥物耐藥性的影響及其常見(jiàn)耐藥基因的表達(dá)。方法·使用融合PCR和同源重組技術(shù),以白念珠菌SN152菌株基因組DNA、帶有篩選標(biāo)記的質(zhì)粒DNA為模板構(gòu)建敲除組件。采用醋酸鋰轉(zhuǎn)染法將敲除組件轉(zhuǎn)染入SN152中,從而獲得ERG3^+/-和ERG3^-/-菌株。采用微量肉湯稀釋法來(lái)判斷SN152、ERG3^+/-和ERG3^-/-菌株對(duì)唑類(lèi)藥物的耐藥性差異,同時(shí)使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)菌株中的常見(jiàn)耐藥基因。結(jié)果·獲得白念珠菌ERG3敲除株。ERG3^-/-菌株對(duì)唑類(lèi)藥物的耐藥性明顯高于ERG3^+/-和SN152菌株。ERG3^-/-菌株的常見(jiàn)耐藥基因（CDR1、CDR2、MDR1、ERG11）表達(dá)顯著上升（均P<0.05）。結(jié)論·成功構(gòu)建白念珠菌ERG3敲除株。ERG3基因的敲除提高了白念珠菌唑類(lèi)藥物的耐藥性,且該基因表達(dá)下調(diào)的同時(shí)伴隨其他耐藥基因的表達(dá)上調(diào)。 

【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2020,40(02)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
1 對(duì)象與方法
    1.1 研究對(duì)象、引物及試劑
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 引物引物由生工生物工程（上海）有限公司合成，引物序列及合成片段見(jiàn)表2～4。
        1.1.3 試劑
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 白念珠菌基因組抽提
        1.2.2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化與抽提
        1.2.3 構(gòu)建同源敲除組件
        1.2.4 目的基因ERG3敲除株的構(gòu)建與鑒定
        1.2.5 藥敏試驗(yàn)
        1.2.6 耐藥相關(guān)基因表達(dá)水平檢測(cè)
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 ERG3基因缺失菌構(gòu)建成功
    2.2 ERG3基因敲除對(duì)白念珠菌唑類(lèi)藥物耐藥性的影響
    2.3 ERG3+/-株耐藥基因水平的變化
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]融合PCR結(jié)合同源重組技術(shù)敲除白色假絲酵母菌FLO8基因[J]. 李文靜,劉錦燕,史冊(cè),王影,趙悅,項(xiàng)明潔.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016(03)
[2]白念珠菌鋅簇轉(zhuǎn)錄因子編碼基因mrr2敲除與鑒定[J]. 王影,呂權(quán)真,閻瀾,劉錦燕,史冊(cè),李文靜,項(xiàng)明潔.  診斷學(xué)理論與實(shí)踐. 2015(02)
[3]白念珠菌基因敲除技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 譚宏月,陳麗華,皇幼明,鐘彬,顧軍,溫海.  中國(guó)真菌學(xué)雜志. 2012(06)
[4]異源性篩選標(biāo)記對(duì)白假絲酵母菌耐受各種應(yīng)激的影響[J]. 李星星,李德東,閻瀾,姜遠(yuǎn)英.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(09)



本文編號(hào)：3029259