目的·構建白念珠菌ERG3基因敲除株,分析ERG3敲除對白念珠菌唑類藥物耐藥性的影響及其常見耐藥基因的表達。方法·使用融合PCR和同源重組技術,以白念珠菌SN152菌株基因組DNA、帶有篩選標記的質(zhì)粒DNA為模板構建敲除組件。采用醋酸鋰轉(zhuǎn)染法將敲除組件轉(zhuǎn)染入SN152中,從而獲得ERG3^+/-和ERG3^-/-菌株。采用微量肉湯稀釋法來判斷SN152、ERG3^+/-和ERG3^-/-菌株對唑類藥物的耐藥性差異,同時使用實時熒光定量PCR檢測菌株中的常見耐藥基因。結果·獲得白念珠菌ERG3敲除株。ERG3^-/-菌株對唑類藥物的耐藥性明顯高于ERG3^+/-和SN152菌株。ERG3^-/-菌株的常見耐藥基因（CDR1、CDR2、MDR1、ERG11）表達顯著上升（均P<0.05）。結論·成功構建白念珠菌ERG3敲除株。ERG3基因的敲除提高了白念珠菌唑類藥物的耐藥性,且該基因表達下調(diào)的同時伴隨其他耐藥基因的表達上調(diào)。 

【文章來源】：上海交通大學學報(醫(yī)學版). 2020,40(02)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 對象與方法
    1.1 研究對象、引物及試劑
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 引物引物由生工生物工程（上海）有限公司合成，引物序列及合成片段見表2～4。
        1.1.3 試劑
    1.2 實驗方法
        1.2.1 白念珠菌基因組抽提
        1.2.2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化與抽提
        1.2.3 構建同源敲除組件
        1.2.4 目的基因ERG3敲除株的構建與鑒定
        1.2.5 藥敏試驗
        1.2.6 耐藥相關基因表達水平檢測
    1.3 統(tǒng)計學方法
2 結果
    2.1 ERG3基因缺失菌構建成功
    2.2 ERG3基因敲除對白念珠菌唑類藥物耐藥性的影響
    2.3 ERG3+/-株耐藥基因水平的變化
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]融合PCR結合同源重組技術敲除白色假絲酵母菌FLO8基因[J]. 李文靜,劉錦燕,史冊,王影,趙悅,項明潔.  上海交通大學學報(醫(yī)學版). 2016(03)
[2]白念珠菌鋅簇轉(zhuǎn)錄因子編碼基因mrr2敲除與鑒定[J]. 王影,呂權真,閻瀾,劉錦燕,史冊,李文靜,項明潔.  診斷學理論與實踐. 2015(02)
[3]白念珠菌基因敲除技術的研究進展[J]. 譚宏月,陳麗華,皇幼明,鐘彬,顧軍,溫海.  中國真菌學雜志. 2012(06)
[4]異源性篩選標記對白假絲酵母菌耐受各種應激的影響[J]. 李星星,李德東,閻瀾,姜遠英.  第二軍醫(yī)大學學報. 2012(09)



本文編號：3029259