目的研究轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子βⅠ型受體（transforming growth factor beta typeⅠreceptor,TGF-βRⅠ）阻斷劑SB-505124對(duì)軟骨細(xì)胞增殖、分化及細(xì)胞外基質(zhì)的影響與機(jī)制。方法利用Western blot檢測(cè)不同濃度的SB-505124處理后,前軟骨細(xì)胞系A(chǔ)TDC5中p-Smad2/3的變化。MTT法檢測(cè)SB-505124處理對(duì)ATDC5細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖的影響及時(shí)間、濃度依賴性效應(yīng)。Western blot檢測(cè)c-Myc蛋白水平的變化。Real-time PCR檢測(cè)SB-505124處理后軟骨分化、細(xì)胞外基質(zhì)合成及降解相關(guān)分子CollagenⅡ、Aggrecan及Adamts5表達(dá)與變化,并利用阿爾新藍(lán)染色法檢測(cè)SB-505124處理對(duì)ATDC5細(xì)胞中蛋白聚糖合成的影響。結(jié)果 Western blot檢測(cè)結(jié)果示:SB-505124處理ATDC5細(xì)胞明顯抑制TGF-β1激活的p-Smad2/3,并呈濃度依賴性;MTT檢測(cè)結(jié)果示:SB-505124濃度和時(shí)間依賴性的抑制ATDC5細(xì)胞增殖;Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果示:SB-505124處理明顯抑... 

【文章來(lái)源】：第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013,35(10)北大核心

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Westernblot檢測(cè)SB-505124抑制c-Myc蛋白的表達(dá)

2．5阿爾新藍(lán)染色檢測(cè)SB-505124對(duì)軟骨蛋白聚糖合成的影響對(duì)經(jīng)ITS進(jìn)行軟骨誘導(dǎo)分化7d的ATDC5細(xì)胞的Micromass行阿爾新藍(lán)染色，體視學(xué)顯微鏡下觀察拍照，與對(duì)照組相比，SB-505124處理組明顯抑制蛋白聚糖的表達(dá)，表現(xiàn)為處理組細(xì)胞外基質(zhì)阿爾新藍(lán)染色明顯變淺(圖4)。6543210相對(duì)基因表達(dá)量CollagenⅡAggrecanAdamts5對(duì)照組aSB鄄505124處理組aaa:P＜0.01，與對(duì)照組比較圖3Real-timePCR檢測(cè)SB-505124對(duì)軟骨分化和軟骨外基質(zhì)合成及降解標(biāo)志物的影響ABA:對(duì)照組;B:SB-505124處理組圖4體視學(xué)顯微鏡下觀察阿爾新藍(lán)染色后細(xì)胞外基質(zhì)著色情況(×20)3討論TGF-β信號(hào)通過(guò)激活經(jīng)典與非經(jīng)典的Smad通路參與了細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡等生理過(guò)程的調(diào)節(jié)，在胚胎發(fā)育、創(chuàng)傷愈合、腫瘤發(fā)生、造血及炎癥反應(yīng)等生理病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用［3］。經(jīng)典的TGF-β/Smad信號(hào)通路包括配體、受體及Smad蛋白。哺乳動(dòng)物中主要存在TGF-β1～3亞型，TGF-β受體屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶受體家族，包括TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、TGF-βRⅢ，其中TGF-βRⅡ具有自身磷酸化功能，直接與TGF-β結(jié)合。TGF-βRⅠ又稱ALK5，有高度保守的富含甘氨酸及蘇氨酸殘基的GS區(qū)，該GS區(qū)被TGF-βRⅡ磷酸化后使TGF-βRⅠ具有激酶活性。參與TGF-β信號(hào)通路的Smad蛋白包括通用型Smad4、受體激活型Smad2、Smad3及抑制型Smad7。經(jīng)典TGF-β/Smad信號(hào)通路的激活過(guò)程大致為:TGF-βs首先與TGF-βRⅡ結(jié)合，TGF-βRⅡ發(fā)生二聚化并導(dǎo)致自身磷酸化，磷酸化的TGF-βRⅡ進(jìn)一步磷酸化TGF-βRⅠ的GS區(qū)，導(dǎo)致TGF-βRⅠ受體絲氨酸/蘇氨酸激酶激活，從而特異性識(shí)別并激活Smad2/3，磷酸化其MH2區(qū)SSXS結(jié)構(gòu)，激活后的Smad2/3與受體解離并與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)Smad4結(jié)合，形成?

2．5阿爾新藍(lán)染色檢測(cè)SB-505124對(duì)軟骨蛋白聚糖合成的影響對(duì)經(jīng)ITS進(jìn)行軟骨誘導(dǎo)分化7d的ATDC5細(xì)胞的Micromass行阿爾新藍(lán)染色，體視學(xué)顯微鏡下觀察拍照，與對(duì)照組相比，SB-505124處理組明顯抑制蛋白聚糖的表達(dá)，表現(xiàn)為處理組細(xì)胞外基質(zhì)阿爾新藍(lán)染色明顯變淺(圖4)。6543210相對(duì)基因表達(dá)量CollagenⅡAggrecanAdamts5對(duì)照組aSB鄄505124處理組aaa:P＜0.01，與對(duì)照組比較圖3Real-timePCR檢測(cè)SB-505124對(duì)軟骨分化和軟骨外基質(zhì)合成及降解標(biāo)志物的影響ABA:對(duì)照組;B:SB-505124處理組圖4體視學(xué)顯微鏡下觀察阿爾新藍(lán)染色后細(xì)胞外基質(zhì)著色情況(×20)3討論TGF-β信號(hào)通過(guò)激活經(jīng)典與非經(jīng)典的Smad通路參與了細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡等生理過(guò)程的調(diào)節(jié)，在胚胎發(fā)育、創(chuàng)傷愈合、腫瘤發(fā)生、造血及炎癥反應(yīng)等生理病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用［3］。經(jīng)典的TGF-β/Smad信號(hào)通路包括配體、受體及Smad蛋白。哺乳動(dòng)物中主要存在TGF-β1～3亞型，TGF-β受體屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶受體家族，包括TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、TGF-βRⅢ，其中TGF-βRⅡ具有自身磷酸化功能，直接與TGF-β結(jié)合。TGF-βRⅠ又稱ALK5，有高度保守的富含甘氨酸及蘇氨酸殘基的GS區(qū)，該GS區(qū)被TGF-βRⅡ磷酸化后使TGF-βRⅠ具有激酶活性。參與TGF-β信號(hào)通路的Smad蛋白包括通用型Smad4、受體激活型Smad2、Smad3及抑制型Smad7。經(jīng)典TGF-β/Smad信號(hào)通路的激活過(guò)程大致為:TGF-βs首先與TGF-βRⅡ結(jié)合，TGF-βRⅡ發(fā)生二聚化并導(dǎo)致自身磷酸化，磷酸化的TGF-βRⅡ進(jìn)一步磷酸化TGF-βRⅠ的GS區(qū)，導(dǎo)致TGF-βRⅠ受體絲氨酸/蘇氨酸激酶激活，從而特異性識(shí)別并激活Smad2/3，磷酸化其MH2區(qū)SSXS結(jié)構(gòu)，激活后的Smad2/3與受體解離并與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)Smad4結(jié)合，形成?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]pEGFP-N1-TGF-β1重組質(zhì)粒對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及侵襲性的影響[J]. 于宏,姜政,王丕龍.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2010(09)



本文編號(hào)：3015165