本文關(guān)鍵詞：DNA甲基化分析中重亞硫酸鹽處理DNA樣本的轉(zhuǎn)化效率評(píng)估方法的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：在DNA甲基化研究中,重亞硫酸鹽處理DNA是一種應(yīng)用廣泛的實(shí)驗(yàn)方法。重亞硫酸鹽能將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶。重亞硫酸鹽處理DNA的轉(zhuǎn)化效率決定了DNA甲基化檢測(cè)的準(zhǔn)確性,未完全轉(zhuǎn)化的DNA會(huì)在后續(xù)的分析中導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。因此,評(píng)估重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化DNA的效率以提高甲基化研究的準(zhǔn)確性是非常必要的。本研究提出一種簡(jiǎn)單可行的檢測(cè)方法,通過(guò)Real time PCR評(píng)估重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化DNA的效率。目的：建立一種評(píng)估重亞硫酸鹽處理DNA樣本后胞嘧啶轉(zhuǎn)化效率的有效方法,快速、方便和準(zhǔn)確地檢測(cè)DNA樣本經(jīng)重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化的效率。方法：以兩組不同的TaqMan Real time PCR檢測(cè)重亞硫酸鹽處理的和未處理的DNA序列,分別建立轉(zhuǎn)化與未轉(zhuǎn)化的β-Actin啟動(dòng)子上游參照序列DNA的Ct值以及對(duì)應(yīng)的DNA拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,再使用相同探針檢測(cè)人源的DNA經(jīng)重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化后的樣本。使用公式：轉(zhuǎn)化率%=轉(zhuǎn)化的DNA拷貝數(shù)／(轉(zhuǎn)化DNA拷貝數(shù)+未轉(zhuǎn)化的DNA拷貝數(shù))x 100%。設(shè)計(jì)與已知物種無(wú)同源性的序列作為參照序列,將該序列作為參照加入待處理DNA樣本中,使用SYBR Green Real time PCR方法評(píng)估廣泛物種的DNA經(jīng)重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化的效率。結(jié)果：建立轉(zhuǎn)化與未轉(zhuǎn)化的DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線,分別使用不同探針和引物檢測(cè)處理后的DNA樣本,并使用已知的DNA樣本評(píng)估該3-Actin啟動(dòng)子上游序列評(píng)估該方法的可靠性;同時(shí)檢測(cè)了以無(wú)物種同源性的序列作為參照序列的可靠性,使該方法具有更廣泛的應(yīng)用價(jià)值。結(jié)論：該方法能夠有效的評(píng)估任何物種來(lái)源的DNA樣品重亞硫酸鹽的轉(zhuǎn)化率,為提高DNA甲基化分析準(zhǔn)確性提供有效方法。
【關(guān)鍵詞】：DNA甲基化 重亞硫酸鹽 Real time PCR 轉(zhuǎn)化率
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R3416
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-18
• 第一部分 檢測(cè)人源DNA的重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化效率18-31
• 引言18
• 材料和方法18-27
• 結(jié)果27-30
• 小結(jié)30-31
• 第二部分 廣泛物種DNA的重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化率檢測(cè)31-40
• 引言31
• 材料和方法31-37
• 結(jié)果37-39
• 小結(jié)39-40
• 討論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述 基因DNA甲基化及其功能45-57
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 在校期間發(fā)表論文57-58
• 致謝58-59

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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9 肖珩;田l

本文編號(hào)：301391