目的:制備THBS2特異性單克隆抗體并鑒定其特性,為臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。方法:表達(dá)并純化THBS2不同截?cái)囿w片段的GST融合蛋白,經(jīng)小鼠免疫、細(xì)胞融合及篩選,制備THBS2特異性單克隆抗體,然后對獲得的單抗親和力和特異性及在不同免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)行鑒定,最后采用免疫沉淀法對36例胰腺癌患者及20例正常人血清THBS2進(jìn)行檢測。結(jié)果:獲得了10株雜交瘤細(xì)胞株,均能穩(wěn)定分泌抗體;10株單抗經(jīng)ELISA、Western blot和免疫沉淀證實(shí)均能特異性識(shí)別人THBS2,且發(fā)現(xiàn)THBS2在胰腺癌患者血清中的表達(dá)水平顯著高于正常人（P<0.000 1）。結(jié)論:成功制備獲得了親和力高、特異性好的抗人THBS2單克隆抗體,為血清THBS2的檢測奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國免疫學(xué)雜志. 2020,36(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

GST融合蛋白的重組、表達(dá)和純化

為檢測所獲單抗與THBS2片段的特異反應(yīng),我們分別用GST-1#和GST-2#融合蛋白包被96孔板,然后用抗1#片段及抗2#片段的不同單克隆抗體作為一抗,羊抗鼠酶標(biāo)抗體作為二抗進(jìn)行常規(guī)ELISA 檢測,從圖3B和圖3C可知,抗1#片段抗體4E11、5A2、9B6、10E5和抗2#片段抗體6H8、7B12、7E2、7F5、 9F7、11A10只特異性地與相應(yīng)THBS2片段反應(yīng),與GST 蛋白均不反應(yīng)。在Western blot實(shí)驗(yàn)中,他們也均可與相應(yīng)THBS2片段特異結(jié)合,與GST 不結(jié)合(圖3E和圖3F)。圖3 單克隆抗體與THBS2片段的反應(yīng)特異性檢測

單克隆抗體與THBS2片段的反應(yīng)特異性檢測

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多種腫瘤標(biāo)志物在胰腺癌中的診斷價(jià)值及相關(guān)性研究[J]. 林文科,吳吉芳,鄭志昂.  中國免疫學(xué)雜志. 2017(01)
[2]Epidemiology of pancreatic cancer[J]. Milena Ilic,Irena Ilic.  World Journal of Gastroenterology. 2016(44)



本文編號(hào)：3009735