目的對按標(biāo)準(zhǔn)化工藝流程制備的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSCs）制劑進(jìn)行微生物學(xué)安全性評價。方法人臍帶華通氏膠分離的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)擴增至P5代。顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)特征,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá);培養(yǎng)法檢測細(xì)菌、真菌污染,指示劑培養(yǎng)顯色法和快速聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法檢測支原體污染,鱟試劑凝膠法檢測細(xì)菌內(nèi)毒素;膠體金法檢驗特定人源病毒、梅毒螺旋體;熒光定量PCR法檢測人乳頭瘤病毒（HPV）。結(jié)果按照標(biāo)準(zhǔn)化流程分離培養(yǎng)hUC-MSCs傳代至P5代呈均一的長梭型成纖維細(xì)胞樣貼壁生長,細(xì)胞表面標(biāo)志物CD73、CD90和CD105陽性率大于98%,CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR<2%;受檢人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞鱟試劑凝膠法檢測內(nèi)毒素水平小于0.25EU/mL,培養(yǎng)檢測未見細(xì)菌、真菌菌落生長,指示劑培養(yǎng)顯色法和快速PCR檢測均顯示無支原體污染;膠體金法和熒光定量PCR法檢測特定人源病毒、梅毒螺旋體和HPV（包含18種高危亞型）全部為陰性結(jié)果。所有檢測方法的陽性對照標(biāo)本均呈陽性結(jié)果,證實檢測方法穩(wěn)定可靠。結(jié)論本研究采用的標(biāo)準(zhǔn)化干細(xì)胞制備工藝流程穩(wěn)定可靠,采用... 

【文章來源】：重慶醫(yī)學(xué). 2020,49(12)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

第5代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在光鏡下的形態(tài)特征（×100)

檢查結(jié)果顯示第5代次的hUC-MSCs的表面標(biāo)志物CD73、CD90、CD105陽性表達(dá)率均大于98%,CD34、CD14、CD45、CD19、HLA-DR陽性表達(dá)率均小于2%，見圖2。2.3 細(xì)菌、真菌污染檢測結(jié)果

支原體指示劑培養(yǎng)顯色法檢測結(jié)果顯示，陽性對照組和實驗組hUC-MSCs的培養(yǎng)基顏色相差極大，可見明顯差異；陰性對照組和實驗組hUC-MSCs的培養(yǎng)基顏色接近。通過快速PCR檢測法檢測結(jié)果顯示，實驗組和陰性對照組只呈現(xiàn)內(nèi)參條帶產(chǎn)生，陽性組則有很亮的支原體特異條帶出現(xiàn)。支原體指示劑培養(yǎng)顯色法和快速PCR檢測法檢測結(jié)果均為陰性，未發(fā)現(xiàn)支原體污染，見圖4。圖4 支原體檢測結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2991101