目的:擬制備靈敏、特異的1-芘丁酸（PBA）單克隆抗體并對其免疫學(xué)性能進(jìn)行鑒定。方法:碳二亞胺法（EDC）制備人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,選擇血清效價高、靈敏度良好的小鼠進(jìn)行細(xì)胞融合并篩選出分泌抗PBA單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞株,體內(nèi)誘生腹水法批量制備抗體并對其免疫學(xué)性能進(jìn)行鑒定。結(jié)果:篩選出能穩(wěn)定分泌PBA單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞株10C2A6,單克隆抗體效價為1∶2.56×10⁵,IC₅₀為0.86 ng/ml,亞型為IgG2b型,親和常數(shù)為1.96×10⁹ L/mol,與芘、1-芘甲醛和1-芘甲醇的交叉反應(yīng)率分別為1.74%、1.42%和0.63%,與其他物質(zhì)交叉反應(yīng)率均小于0.05%。結(jié)論:本實驗成功制備出了靈敏、特異的PBA單克隆抗體,并為其免疫學(xué)檢測方法的建立奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國免疫學(xué)雜志. 2020,36(09)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

PBA-mAb親和曲線

表2 免疫小鼠血清靈敏度Tab.2 Serum sensitivity of immunized mice No. PBA concentration (ng/ml) Positive Blank 300 150 75 37 18.75 9.38 4.69 2.34 1 0.41 0.431 0.724 0.749 0.852 1.012 1.001 1.132 1.234 0.025 2 0.168 0.274 0.388 0.542 0.632 0.894 0.951 1.112 1.032 0.015 3 0.064 0.094 0.102 0.148 0.356 0.478 0.632 0.803 0.875 0.023 4 0.014 0.036 0.068 0.132 0.238 0.478 0.532 0.683 1.046 0.004圖5 PBA-mAb亞型鑒定

單抗效價采用間接ELISA測定。單抗靈敏度測定:分別配制濃度為5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078 125、0 ng/ml的PBA標(biāo)準(zhǔn)品溶液,以間接競爭ELISA測定抗體靈敏度。單抗亞型鑒定按照單克隆抗體亞型試劑盒鑒定步驟進(jìn)行操作;單抗親和力測定:根據(jù)參考文獻(xiàn)[18]把PBA-OVA稀釋到1 μg/ml和0.5 μg/ml進(jìn)行包板,采用間接ELISA法對單克隆抗體親和力進(jìn)行測定,計算其親和力常數(shù)Ka值;單抗特異性測定:間接競爭ELISA測定單克隆抗體與PBA的類似物1-芘甲醇、1-芘甲醛、苯并芘、菲、萘、芘以及BSA和OVA之間的交叉反應(yīng)。2 結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于氮化碳復(fù)合材料磁性固相萃取結(jié)合高效液相色譜法測定尿液中3種羥基多環(huán)芳烴[J]. 念琪循,劉園滿,孫冰,王曼曼.  色譜. 2019(03)
[2]卡洛芬單克隆抗體的制備[J]. 熊艷華,高愛中,汪毅.  中國免疫學(xué)雜志. 2017(11)

博士論文
[1]玉米赤霉烯酮免疫學(xué)快速檢測技術(shù)研究[D]. 孫亞寧.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017



本文編號：2976194