本文關(guān)鍵詞：抗氧化劑對(duì)銅綠假單胞菌致病性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa),作為一種院內(nèi)常見(jiàn)致病菌,可引起感染宿主細(xì)胞多重傷害,其中氧化傷害是細(xì)菌導(dǎo)致感染病人死亡的原因之一。P. aeruginosa作為好氧細(xì)菌,當(dāng)以N03-、NO2-為電子受體時(shí),可在低氧條件如生物被膜和氣道粘液下生存,此環(huán)境能幫助細(xì)菌逃脫抗生素的抑殺作用,使得其感染性疾病的治療難度進(jìn)一步增加。在本實(shí)驗(yàn)中,我們研究了抗氧化劑對(duì)P. aeruginosa的致病性影響,以及在低氧條件下P. aeruginosa的耐藥性變化。谷胱甘肽(glutathione, GSH)、N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cystine, NAC)等作為人體內(nèi)最重要的抗氧化劑,在機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)中承擔(dān)重要作用。在本研究中,我們通過(guò)谷胱甘肽合成酶基因(Glutathione synthetase, gshB)突變株P(guān)AOl (△gshB)與野生型PAO1比較發(fā)現(xiàn),突變株綠膿菌素(pyocyanine, PCN)和生物被膜(Biofilm, BF)量降低,泳動(dòng)和叢動(dòng)能力明顯減弱,毒性及感染能力明顯下降。當(dāng)外加GSH或NAC時(shí),兩株菌生物被膜生成量均減少。且發(fā)現(xiàn)外加GSH雖可促進(jìn)兩株菌對(duì)A549細(xì)胞的粘附能力,但能降低P.aeruginosa對(duì)細(xì)胞的內(nèi)化能力及毒性傷害。利用果蠅感染實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)突變體及在外加GSH情況下,P.aeruginosa毒性降低。細(xì)胞內(nèi)缺失GSH和外加GSH的研究結(jié)果似乎矛盾,我們推測(cè)這兩種情況下GSH參與的調(diào)節(jié)途徑不同或者外源GSH進(jìn)入細(xì)胞后存在形式發(fā)生了變化,但是,綜合二者在各方面對(duì)P.aeruginosa毒性影響的比較,在外加GSH情況下P.aeruginosa感染能力下降,且對(duì)A549細(xì)胞起保護(hù)作用。于P.aeruginosa耐藥性而言,在有氧條件下,外源NAC可降低細(xì)菌對(duì)抗生素慶大霉素、紅霉素、卡那霉素以及硫酸鏈霉素的敏感性,增加對(duì)氯霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素等抗生素的敏感性；而在低氧條件下,外源NAC則可使抗生素慶大霉素、硫酸鏈霉素以及阿奇霉素的最低抑制濃度(MIC)分別提高8、2和3倍,氯霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素等抗生素的MIC分別降低5、2和8倍。且NAC在低氧條件下可顯著降低生物被膜生成量�；谝陨涎芯康膶�(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們得到抗氧化劑可降低P.aeruginosa毒性并對(duì)被感細(xì)胞起保護(hù)作用。希望此研究可以揭示抗氧化系統(tǒng)在銅綠假單胞菌感染過(guò)程中的作用機(jī)制,為解決臨床感染提供有益探索。
【關(guān)鍵詞】：銅綠假單胞菌 抗氧化劑 致病性 A549細(xì)胞 低氧條件
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R378
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-10
• 縮寫對(duì)比表10-12
• 第一章 緒論12-22
• 1.1 銅綠假單胞菌抗藥性機(jī)制研究概況12-15
• 1.1.1 外膜低通透性12-13
• 1.1.2 主動(dòng)外排系統(tǒng)13
• 1.1.3 基因突變13-14
• 1.1.4 生物被膜的生成14-15
• 1.2 銅綠假單胞菌致病因子研究15-18
• 1.2.1 粘附因子15-16
• 1.2.2 細(xì)胞外毒性產(chǎn)物16-18
• 1.3 細(xì)胞內(nèi)抗氧化水平18-20
• 1.3.1 抗氧化劑18-19
• 1.3.2 抗氧化劑與細(xì)菌致病性關(guān)系19-20
• 1.4 在低氧條件下銅綠假單胞菌的致病性20-21
• 1.5 研究目的及意義21-22
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法22-37
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料22-26
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株22
• 2.1.2 培養(yǎng)基及溶液的配制22-24
• 2.1.3 抗生素24-25
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑25-26
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)相關(guān)儀器26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法26-37
• 2.2.1 銅綠假單胞菌(PAO1)的最低抑制濃度(MIC)檢測(cè)26-27
• 2.2.2 抗氧化劑對(duì)銅綠假單胞菌(PAO1)生長(zhǎng)活性的影響27
• 2.2.3 不同抗生素對(duì)銅綠假單胞菌(PAO1)的最低抑制濃度(MIC)27
• 2.2.4 生物被膜的檢測(cè)—結(jié)晶紫法27-28
• 2.2.5 生物被膜的檢測(cè)—蓋玻片法28
• 2.2.6 質(zhì)粒DNA提取28-29
• 2.2.7 銅綠假單胞菌感受態(tài)細(xì)胞的制備29
• 2.2.8 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)29
• 2.2.9 基因表達(dá)水平檢測(cè)29-30
• 2.2.10 銅綠假單胞菌運(yùn)動(dòng)性實(shí)驗(yàn)30
• 2.2.11 體外構(gòu)建A549細(xì)胞感染模型30-31
• 2.2.12 A549細(xì)胞相關(guān)感染實(shí)驗(yàn)研究31-35
• 2.2.13 銅綠假單胞菌感染果蠅實(shí)驗(yàn)35-37
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-53
• 3.1 抗氧化劑對(duì)銅綠假單胞菌耐藥性影響37-40
• 3.1.1 有氧和低氧條件下抗氧化劑對(duì)P.aeruginosa MIC的影響37-38
• 3.1.3 抗氧化劑對(duì)不同抗生素MIC的影響38-39
• 3.1.4 阿奇霉素對(duì)PAO1的殺菌能力分析39-40
• 3.2 抗氧化劑對(duì)P.aeruginosa毒性因子影響40-45
• 3.2.1 抗氧化劑對(duì)P.aeruginosa生物被膜生成量的影響40-44
• 3.2.2 GSH對(duì)P.aeruginosa膜相關(guān)蛋白基因表達(dá)的影響44-45
• 3.3 GSH在P.aeruginosa感染A549細(xì)胞過(guò)程中的作用45-53
• 3.3.1 GSH在P.aeruginosa感染A549細(xì)胞過(guò)程中的作用45-51
• 3.3.2 在果蠅感染實(shí)驗(yàn)中,GSH對(duì)P.aeruginosa毒性和入侵能力的影響51-53
• 小結(jié)和討論53-55
• 參考文獻(xiàn)55-64
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果64-65
• 致謝65

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本文編號(hào)：297567