本文關(guān)鍵詞：自噬調(diào)控神經(jīng)干細胞的分化潛能，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察源自不同年齡階段小鼠神經(jīng)干細胞(NSCs)分化能力的改變,與自噬基因的表達變化,探討自噬對NSCs分化能力的調(diào)控作用。方法:分離提取胚胎14d(E14)、新生(P0)、生后30d(P30)和90d(P90)小鼠NSCs,應(yīng)用NSCs標記物nestin進行免疫熒光染色鑒定實驗。NSCs經(jīng)1%胎牛血清誘導分化后,Tuj1和GFAP免疫熒光染色比較不同年齡NSCs分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞的比例。分離培養(yǎng)P0和P300小鼠NSCs制備超薄切片,應(yīng)用透射電鏡觀察NSCs超微結(jié)構(gòu)。采用SYBR Green Real-time PCR(QPCR)分析不同年齡小鼠側(cè)腦室室管膜下區(qū)(SVZ)和不同年齡階段NSCs,自噬相關(guān)基因ATG3,ATG5,ATG7及Beclin1的表達變化。另外,觀察NSCs分化前后自噬相關(guān)基因的表達變化。并且分別應(yīng)用1μM、5μM和10μM自噬抑制劑Ly294002作用于NSCs,通過Tuj1和GFAP免疫熒光染色分析自噬對神經(jīng)干細胞分化能力的影響。結(jié)果:1.隨著年齡增長NSCs形成神經(jīng)球的平均直徑降低,P30和P90 NSCs形成70~100μm神經(jīng)球的數(shù)量較E14和P0降低~65%。誘導分化實驗結(jié)果顯示隨年齡增加,NSCs分化為神經(jīng)元的比例降低(P0.05),而分化為星形膠質(zhì)細胞的能力上升(P0.05)。其中P90小鼠Tuj1的陽性率為8%±2%,較E14小鼠(29%±3%)明顯下降(P0.01)而其GFAP陽性細胞率為72%±4%,較E14小鼠(39%±3%)明顯升高(P0.01)。2.透射電鏡結(jié)果顯示P300 NSCs線粒體嵴出現(xiàn)斷裂腫脹,正常狀態(tài)的線粒體數(shù)目較P0明顯減少,并且內(nèi)聚集大量自噬小體,提示P300 NSCs自噬功能降低。QPCR結(jié)果顯示隨年齡增長SVZ自噬相關(guān)基因ATG3、ATG5、ATG7的表達水平降低,但Beclin1表達水平無顯著變化。P90 NSCs ATG3、ATG5、ATG7和Beclin1表達水平分別較E14下降約60%、52%、66%和84%。提示隨著年齡增長NSCs自噬活性逐步下調(diào)。3.NSCs誘導分化培養(yǎng)5d后,Tuj1和GFAP的表達量分別較對照組增高4.30±0.65倍(P0.05)和11.39±0.35倍(P0.05)。同時,ATG3、ATG5、ATG7和Beclin1m RNA表達水平分別較未分化前增高1.47±0.34(P0.05)、1.66±0.79(P0.05)、4.31±0.94(P0.05)和3.73±2.56(P0.05);提示自噬可能參與了NSCs向神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞的分化。分別用1μM、5μM和10μM自噬抑制劑Ly294002干預E14 NSCs分化后,發(fā)現(xiàn)ly294002能夠抑制NSCs向神經(jīng)元分化,并且表現(xiàn)出濃度依賴性,而對星形膠質(zhì)細胞無明顯影響。Ly294002處理組Tuj1的陽性率分別為DMSO組的109%±2%(P0.05)、41%±2%(P0.05)和30%±1%(P0.05);而Ly294002處理組GFAP的陽性率分別為DMSO組的112%±1%(P0.05)、89%±2%(P0.05)和113%±3%(P0.05),提示自噬主要調(diào)控NSCs向神經(jīng)元的分化。結(jié)論:1.隨年齡增長NSCs分化為神經(jīng)元的數(shù)量逐漸減少,而分化為星形膠質(zhì)細胞的比例上升。2.成年NSCs內(nèi)自噬小體堆積并且自噬相關(guān)基因的表達水平顯著降低,提示自噬與NSCs功能維持相關(guān)。3.自噬參與調(diào)控NSCs分化,抑制自噬導致NSCs分化為神經(jīng)元的比例降低。
【關(guān)鍵詞】：NSCs 分化 自噬
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 常用縮寫詞中英文對照表9-10
• 前言10-12
• 1 材料與方法12-22
• 1.1 材料與試劑12-13
• 1.2 實驗方法13-21
• 1.3 統(tǒng)計學處理21-22
• 2 結(jié)果22-29
• 2.1 不同年齡NSCs的培養(yǎng)22-24
• 2.2 不同年齡NSCs分化能力的比較24-25
• 2.3 檢測NSCs內(nèi)自噬現(xiàn)象25-26
• 2.4 自噬對NSCs分化能力的影響26-29
• 3 討論29-32
• 4 結(jié)論32-33
• 參考文獻33-37
• 綜述37-51
• 參考文獻45-51
• 致謝51-52
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果52-53
• 個人簡歷53

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Corinne A.Lee-Kubli;Paul Lu;;Induced pluripotent stem cell-derived neural stem cell therapies for spinal cord injury[J];Neural Regeneration Research;2015年01期

  本文關(guān)鍵詞：自噬調(diào)控神經(jīng)干細胞的分化潛能，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：296218