目的通過16SrRNA高通量測序技術,研究膠原誘導性關節(jié)炎（CIA）寒證與熱證大鼠腸道菌群差異。方法雌性Wistar大鼠30只,按隨機數(shù)字表法分為正常組8只、寒證組和熱證組各11只。正常組常規(guī)飼養(yǎng),寒證組和熱證組復制CIA寒熱證候動物模型。從造模第2周起,每周測量1次大鼠右后足踝體表溫度,造模結束后腹主動脈取血檢測凝血因子,取腸道內(nèi)容物,進行總DNA提取,V3-V4可變區(qū)PCR擴增,產(chǎn)物純化后進行測序,測序的有效數(shù)據(jù)進行可操作分類單元（OTUs）聚類,根據(jù)OTUs進行物種注釋、Alpha與Beta多樣性分析,得到樣品的物種信息。結果造模第2周時,寒證組、熱證組大鼠右足溫度較正常組均不同程度升高,3～4周時,與正常組和寒證組比較,熱證組大鼠右足溫逐漸升高,寒證組大鼠右足溫度逐漸降低,第4周時,顯著低于正常組和熱證組;寒證組纖維蛋白原高于正常組和熱證組;測序后得1 213 914條有效序列,聚類后正常組、寒證組及熱證組分別獲得206、335、304個特征OTUs;正常組、寒證組及熱證組間菌群結構差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）,正常組優(yōu)勢菌種有擬桿菌門、蘇黎世桿菌目、蘇黎世桿菌科、... 

【文章來源】：中國中醫(yī)藥信息雜志. 2020年06期

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖通過302各組樣本ob組樣本聚類Number2500bservedspecies稀釋得到的OTUofsequences5000750釋性曲線圖Us差異韋恩圖00圖可以

（藍澡菌門（明確細菌（unclassifi（73.64%），分類_梭菌（Ruminoc（Unspeci（Lactobaci2.6組間差用LEf為差異有統(tǒng)差異效果影菌門（firm（Tenericuteobserved_otus30020010000月第27卷2各組樣本ob組樣本聚類共有343個寒證組有33。見圖3。圖3各組樣腸道菌群組成各組門水平與制柱狀圖。門micutes）、擬桿teobacteria）、Actinobacter（Cyanobacter（Unspecifieied）等。其，見圖4�？凭║nspecificoccaceae）、ified_Bacteroillaceae）等，差異物種篩選fSe法尋找每統(tǒng)計學意義）。影響的大校micutes），寒s），見圖6Number2500第6期bservedspecies稀釋得到的OTU相同OTUs，5個特征OT樣本聚類差異韋恩成結構分析結與科水平豐度門水平各組優(yōu)桿菌門（Bac疣微菌門（ria）、軟壁菌ria）、螺旋體d_Bacteria）其中厚壁菌科水平菌落結ied_Clostridi未具體分oidales）、，見圖5。選每個分組特征。柱狀圖長度門水平正常組寒證組優(yōu)勢�？扑秸fsequences5000750釋性曲線圖Us差異韋恩圖正常組有2Us，熱證組恩圖結果度排名前20優(yōu)勢菌門均為cteroidetes）、Verrucomicr菌門（Teneric體菌門（TM7、未經(jīng)分類門所占比例結構依次為未ales）、瘤胃類_擬桿乳桿菌征微生物（LD度代表每組物組優(yōu)勢菌種為菌種為柔膜組優(yōu)勢菌種寒熱正00中國中醫(yī)藥圖可以206個304個的物為厚壁變形obia）、u

·2.7數(shù)量其（s越示菌樣性一步Per熱0.0組正寒熱48·圖圖7各組大鼠Alpha多樣量（即豐富度中Chao1、opeciesrichn高，Shannon菌群多樣性越性與豐富度未步分析3組rmanova顯示證組與正常01），見圖8。表3各組組別Sh常組6.20證組6.19證組5.6圖6LEfSe分析門7LEfSe分析科腸道菌群多樣樣性主要用來度）與分配上observedspecness），其值越n指數(shù)代表菌越高。結果顯未見明顯差異組間群落Beta示，寒證組與常組之間差異大鼠腸道菌群Alhannon0±0.5129±0.3523±0.9818各組大鼠腸道ChineseJo門水平LDA柱形科水平LDA柱形樣性分析來分析單個樣上的均勻度cies指數(shù)代表越高表示該樣菌群的多樣性顯示，各組大異（P＞0.05a多樣性指數(shù)與熱證組、寒證異均有統(tǒng)計lpha多樣性指數(shù)比Chao1208.13±42.99226.00±29.76188.05±46.42道菌群PCoA分析ournalof圖圖樣品菌群的種（即多樣性）表菌群的豐富樣本菌群豐富性，數(shù)值越高大鼠腸道菌群），見表3。數(shù)，PCoA結證組與正常組計學意義（P比較（—x±s）observedspecie208.13±42.99226.00±29.76188.00±46.43析圖寒證組正常組寒熱正寒熱正Informati種類）。富度富度高表群多進結合組、＜es9633討R中的兩個疾病證與熱造組均不較，熱度逐漸寒證組腫熱痛出現(xiàn)由組在風溫度亦栓的形提示風加。結水量減小便黃熱兩組本熱證及多樣性PCoA現(xiàn)正常說明不同，基間差異種為擬科、莫擬?

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]類風濕關節(jié)炎寒證動物模型的建立與評價[J]. 馬俊福,侯秀娟,劉小平,王穎,丁明輝,鄭煒,朱躍蘭.  中華中醫(yī)藥雜志. 2016(05)

碩士論文
[1]類風濕關節(jié)炎患者腸道菌群分析及致病菌篩選[D]. 譚迪.大連醫(yī)科大學 2018
[2]烏頭湯抗類風濕性關節(jié)炎作用及機制探索[D]. 孫艷群.中國中醫(yī)科學院 2012



本文編號：2957278