目的比較全骨髓貼壁法和骨組織消化法分離獲取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stemcells,BMMSCs）的效果。方法分離獲取小鼠股骨,沖洗骨髓腔并收集骨髓懸液培養(yǎng)BMMSCs為全骨髓貼壁法;去骨髓的股骨剪碎、消化后培養(yǎng)BMMSCs為骨組織消化法。比較兩組BMMSCs的原代細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞傳代增殖能力、免疫表型及成骨分化潛能。結(jié)果骨組織消化法的BMMSCs原代細(xì)胞數(shù)量明顯多于全骨髓組,并且在第7天細(xì)胞就可以融合達(dá)到90%;骨組織組的BMMSCs生長(zhǎng)快,并且細(xì)胞傳代增殖能力比全骨髓組強(qiáng),傳代計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)顯示第5次傳代后,骨組織組的細(xì)胞數(shù)量達(dá)全骨髓組的4倍（P<0.05）;流式表型鑒定結(jié)果顯示,兩組細(xì)胞均高表達(dá)干細(xì)胞表面標(biāo)志物Sca-1及表面黏附分子CD29,其中骨組織組Sca-1及CD29陽(yáng)性細(xì)胞的比例均高于全骨髓組;骨組織組BMMSCs幾乎不表達(dá)CD45和CD11b,而全骨髓組CD45陽(yáng)性細(xì)胞的比例為3.18%,CD11b陽(yáng)性細(xì)胞的比例為9.11%。兩組BMMSCs均能分化為成骨細(xì)胞。結(jié)論骨組織消化法操作簡(jiǎn)單、成本低,且獲得的BMMSC... 

【文章來(lái)源】：嶺南心血管病雜志. 2020年02期

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

成骨誘導(dǎo)分化結(jié)果

分離接種后全骨髓組見(jiàn)大量圓形懸浮細(xì)胞，而骨組織組未見(jiàn)懸浮細(xì)胞。72 h后可見(jiàn)兩組均有大量梭形細(xì)胞貼壁，其中全骨髓組細(xì)胞散落貼壁，骨組織組細(xì)胞呈集落狀于骨碎片周?chē)N壁生長(zhǎng)。全骨髓組BMMSCs細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)至第7天可見(jiàn)細(xì)胞融合達(dá)80%～90%；骨組織組BMMSCs成簇生長(zhǎng)，較全骨髓組生長(zhǎng)快，培養(yǎng)至第5天可見(jiàn)細(xì)胞融合達(dá)80%～90%，兩組細(xì)胞形態(tài)一致，均呈長(zhǎng)梭形貼壁生長(zhǎng)（如圖1）。兩組原代BMMSCs細(xì)胞融合達(dá)到80%～90%時(shí)分別進(jìn)行傳代。全骨髓組BMMSCs細(xì)胞傳代前用PBS清洗以除去非貼壁細(xì)胞。兩組BMMSCs傳至第3、第6和第9代時(shí)細(xì)胞形態(tài)如圖2所示，可見(jiàn)均為長(zhǎng)梭形貼壁細(xì)胞。兩組BMMSCs細(xì)胞中的非貼壁圓形細(xì)胞均隨純化代數(shù)的增加而降低。取第3代以后的BMMSCs進(jìn)行細(xì)胞流式術(shù)和成骨分化實(shí)驗(yàn)。

兩組原代BMMSCs細(xì)胞融合達(dá)到80%～90%時(shí)分別進(jìn)行傳代。全骨髓組BMMSCs細(xì)胞傳代前用PBS清洗以除去非貼壁細(xì)胞。兩組BMMSCs傳至第3、第6和第9代時(shí)細(xì)胞形態(tài)如圖2所示，可見(jiàn)均為長(zhǎng)梭形貼壁細(xì)胞。兩組BMMSCs細(xì)胞中的非貼壁圓形細(xì)胞均隨純化代數(shù)的增加而降低。取第3代以后的BMMSCs進(jìn)行細(xì)胞流式術(shù)和成骨分化實(shí)驗(yàn)。2.2骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)趨勢(shì)及增殖能力比較

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療炎癥性腸病研究進(jìn)展[J]. 崔國(guó)寧,劉喜平.  今日藥學(xué). 2019(01)



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