本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細胞分化為心肌細胞過程中GATA-4和a-MHC的表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞分化為心肌細胞,探究分化過程中細胞的形態(tài)變化規(guī)律,探討分化過程中細胞的形態(tài)變化與GATA-4和a-MHC表達之間的相關(guān)關(guān)系。方法在全骨髓貼壁培養(yǎng)法的基礎(chǔ)上,在離心管中靜置分層,減少摻雜在培養(yǎng)體系中其他種類的細胞。對各代骨髓間充質(zhì)干細胞進行成骨和成脂多分化潛能檢測,以監(jiān)測并建立穩(wěn)定的骨髓間充質(zhì)干細胞系。選用第3代骨髓間充質(zhì)干細胞,以心肌組織裂解液為條件誘導(dǎo)劑,誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞分化為心肌細胞,免疫細胞化學(xué)染色檢測誘導(dǎo)后細胞中cTnT和connexin43的表達情況。倒置顯微鏡下觀察誘導(dǎo)過程中細胞的形態(tài)變化規(guī)律,結(jié)合心肌細胞發(fā)生過程中細胞形態(tài)變化規(guī)律,選定分化過程中5個特異形態(tài)點做為檢測時間點,實時熒光定量PCR檢測細胞中GATA-4和a-MHC mRNA的表達情況。結(jié)果1、以心肌組織裂解液持續(xù)誘導(dǎo)BMSCs,細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化,免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果顯示,當(dāng)誘導(dǎo)至細胞呈網(wǎng)織樣時,細胞中cTnT和connexin43開始有微量表達,且隨著誘導(dǎo)過程的延續(xù),細胞中cTnT和connexin43持續(xù)表達。2、通過反復(fù)多次的誘導(dǎo)實驗,在誘導(dǎo)過程中均可觀察到細胞形態(tài)規(guī)律性的變化：BMSCs由梭形或圓形逐漸變?yōu)槎虠U狀；短桿狀細胞形成突起并逐漸增多,細胞間以突起互相連接成網(wǎng)織樣；短桿狀細胞之間的連接不斷增多,細胞之間端端相連,聚集生長且排列方向趨于一致,呈典型的“竹節(jié)樣”；相鄰的部分細胞互相融合形成多核肌管樣結(jié)構(gòu)。選定以下五個細胞形態(tài)：梭形、短桿狀、網(wǎng)織樣、“竹節(jié)樣”和肌管樣的細胞為誘導(dǎo)過程中的檢測點。3、誘導(dǎo)過程5個檢測點的細胞實時熒光定量PCR結(jié)果顯示：誘導(dǎo)前梭形細胞中,GATA-4和a-MHC低表達；短桿狀細胞中,GATA-4和a-MHC的表達都有輕微增加；網(wǎng)織樣細胞中,GATA-4的表達明顯增強達到表達量高峰,a-MHC表達量較短桿狀細胞時穩(wěn)定增加；“竹節(jié)樣”細胞中,GATA-4持續(xù)高表達,a-MHC表達量穩(wěn)定增加；肌管樣細胞中,GATA-4持續(xù)高表達,a-MHC表達量明顯增加達表達高峰。結(jié)論BMSCs分化為心肌細胞過程中,細胞形態(tài)變化具有明顯的規(guī)律特征。隨著誘導(dǎo)過程中細胞形態(tài)的變化,細胞中心肌相關(guān)特異蛋白cTnT和connexin43的表達逐漸發(fā)生變化。心肌相關(guān)基因GATA-4和a-MH C在分化過程中5個檢測點呈現(xiàn)出不同的特點。在BMSCs分化為心肌細胞過程中,細胞的形態(tài)變化與GATA-4和a-MHC的表達量變化之間具有一定的對應(yīng)關(guān)系。通過GATA-4和a-MH C的表達量的檢測,可初步推斷分化過程中細胞所處形態(tài),進而初步評估細胞的分化發(fā)育狀況。
【關(guān)鍵詞】：心肌 定向分化 GATA-4 a-MHC
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 英文縮略詞5-6
• 摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-29
• 結(jié)果29-32
• 討論32-40
• 結(jié)論40-41
• 問題和展望41-42
• 附圖42-48
• 參考文獻48-55
• 綜述55-65
• 參考文獻62-65
• 致謝65-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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2 張滌生;組織工程學(xué)——現(xiàn)代生物生命科學(xué)的前沿[J];中國工程科學(xué);2000年10期

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本文編號：294915