發(fā)布時間：2020-12-29 06:32

　　扎伊爾型埃博拉病毒（Zaire ebolavirus,EBOV）能在人類和非人靈長類（nonhuman primates,NHPs）體內(nèi)引發(fā)急性嚴(yán)重出血熱病,具有極強(qiáng)的傳染性和致死率。2014年西非爆發(fā)的埃博拉疫情推進(jìn)了相關(guān)疫苗和抗病毒藥物的快速發(fā)展,但截止目前仍沒有獲批的預(yù)防或治療埃博拉病毒的藥物。埃博拉病毒的包膜糖蛋白（glycoprotein,GP）在病毒入侵過程中扮演著關(guān)鍵的角色,是疫苗和抗體研究的重要靶標(biāo)。實驗室前期自主研制的5型腺病毒載體的重組埃博拉疫苗已完成了II期臨床試驗,在人體中具有良好的安全性,并且可有效地激發(fā)免疫反應(yīng)。由于疫苗需要在感染前使用才能達(dá)到保護(hù)效果,所以開展暴露后治療手段的研究很有必要,而單克隆抗體因其良好的特異性和藥代動力學(xué)特點(diǎn),是目前免疫治療的研究熱點(diǎn)。本研究的目的是從疫苗臨床受試者體內(nèi)篩選具有埃博拉病毒中和活性的單克隆抗體,并對其結(jié)合表位和保護(hù)機(jī)制進(jìn)行研究,為埃博拉病毒的暴露后治療提供有效的手段。首先,基于流式分選和單細(xì)胞PCR的抗體篩選平臺,從疫苗受試者血樣中篩選獲得了GP的結(jié)合抗體。利用人類免疫缺陷病毒骨架的重組EBOV假病毒對不同受試者的血清... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

埃博拉病毒的（A）基因組和（B）生命周期[27]

前言RBD 被糖基化、高柔性的 GC 和 MLD 所遮蔽。在次級內(nèi)體中，GC 和 MLD 被組織蛋白酶從 GP 上切掉，將 RBD 暴露出來，形成激活態(tài)的 GP（primed GP，GPcl）[31]。GPcl 的 RBD 通過與內(nèi)體膜上 NPC1 受體的 C 結(jié)構(gòu)域（NPC1 DomianC，NPC1-C）結(jié)合[32]（圖 2C），為病毒的膜融合過程提供機(jī)會。

第一章__埃博拉病毒包膜糖蛋白特異抗體的篩選然配對的抗體輕重鏈可變區(qū)基因。1.5 線性表達(dá)框構(gòu)建抗體全長基因由于獲得的全人源自然配對抗體基因量很大，采用傳統(tǒng)構(gòu)建抗體表達(dá)質(zhì)粒的方法費(fèi)時費(fèi)力，不利于高通量的篩選工作。因此構(gòu)建了如圖 1.1 所示的線性抗體基因表達(dá)框，通過重疊延伸 PCR 將啟動子（PCMV）、前導(dǎo)序列（Ig LH/L）、抗體可變區(qū)(VH/L)、抗體恒定區(qū)（Ig CH/L）和多聚 A 尾（polyA）連接起來構(gòu)成抗體全長表達(dá)基因。


本文編號：2945189