目的:高效真核表達(dá)和純化獲得CD3E蛋白,制備全人源CD3抗體。方法:構(gòu)建CD3E鏈胞外區(qū)真核表達(dá)質(zhì)粒,利用293F懸浮細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并純化獲得高純度蛋白。選取人源化抗體轉(zhuǎn)基因小鼠CAMouse-HG76進(jìn)行免疫,通過(guò)細(xì)胞融合的方法獲得雜交瘤細(xì)胞,再利用ELISA法和流式細(xì)胞分析法篩選CD3特異性單克隆抗體。結(jié)果:成功構(gòu)建重組表達(dá)載體pcDNA3.4-CD3E-mFc,真核細(xì)胞表達(dá)并純化獲得純度為85%的融合蛋白。免疫小鼠后效價(jià)高達(dá)1∶102 400。雜交瘤細(xì)胞篩選獲得3株CD3特異性單克隆抗體。結(jié)論:本研究成功獲得了CD3E融合蛋白和CD3單克隆抗體,為后續(xù)建立ELISA檢測(cè)方法、全人源治療性抗體藥物及相關(guān)研究提供基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2020年08期 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【圖文】：

SDS-PAGE結(jié)果

pcDNA3.4-CD3E-mFc酶切鑒定圖

Western blot結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]子宮內(nèi)膜癌分子分型與PD-1/PD-L1阻斷治療[J]. 高境澤,吳霞.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2018(04)
[2]抗人PD-L1單克隆抗體的制備及其應(yīng)用[J]. 馮沛然,黃建芳,王敏珍,廖偉聰,郝代玲,向軍儉.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2017(06)



本文編號(hào)：2921334