目的本研究通過對從中國錦州和秦皇島地區(qū)分離得到兩株殘翼病毒（Deformed wing virus,DWV）毒株China1-2017（MF770715）和China2-2018（MH165180）的遺傳進(jìn)化關(guān)系和重組情況進(jìn)行分析,全面了解在中國分離到的DWV遺傳背景及其未來流行趨勢,為DWV防治提供參考。通過對DWV結(jié)構(gòu)蛋白VP2的免疫原性研究,探討VP2作為免疫原制備DWV相關(guān)生物制劑的可能性,為DWV深入研究和用于DWV防治的生物制劑研發(fā)提供理論依據(jù)。方法根據(jù)NCBI上公布的美國分離株DWV（GenBank登錄號(hào)AY292384）和韓國分離株DWV（GenBank登錄號(hào)JX878304）的基因組序列設(shè)計(jì)17個(gè)引物,分別對來自中國錦州和秦皇島地區(qū)的2株DWV（分別命名為China1-2017和China2-2018）進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得其完整基因組序列,將分離到的China1-2017和China2-2018序列與來自不同國家的18株DWV分離株,及與DWV密切相關(guān)的兩個(gè)病毒Kakugo病毒（KV）和Varroa destructor virus-1（VDV-1）作為參考序列進(jìn)行同... 

【文章來源】：錦州醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

DWVRT-PCR檢測注：M:DL2000DNAMaker；A：A.melliferaPCR擴(kuò)增產(chǎn)物；B：A.ceranaPCR擴(kuò)增產(chǎn)

注：A 基于 DWV 的 ORF 編碼核苷酸序列的系統(tǒng)發(fā)育樹。B 基于 DWV VP1 區(qū)段的系統(tǒng)發(fā)育樹。C 基于 DWV 的 3C + RdRp 段的系統(tǒng)發(fā)育樹。所有系統(tǒng)發(fā)育樹都是通過最大似然法（ML）方法和 Komura 2 參數(shù)方法構(gòu)建的，具有自助重采樣（1000 次重復(fù)）。 系統(tǒng)發(fā)育樹的每個(gè)分支處的數(shù)字代表自舉值（1000 個(gè)重復(fù)）。 不同顏色的三角形表示DWV 分離株的不同簇。

在所有 9 個(gè)潛在的重組信號(hào)中，China2-2018 毒株在 4266-7507nt 位置重組（圖 4B 和圖 5A），RDP，GENECONV，Bootscan，MAXCHI 四個(gè)算法中P 值均小于 1.0E-6，表明重組是存在的（表 2）。同時(shí)， KV-2001 毒株（信號(hào)2）在 7500-8908nt 和 China-2017 毒株 1315-1878nt 位置的重組 RCS 值分別為 0.621 和 0.606，均大于 0.6，也說明重組也是存在的（表 2）。此外，其他6 個(gè)重組 RCS 值在 0.4-0.6 之間，說明也具有重組的可能性（表 2）。通過對存在的重組進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，China2-2018 毒株在 4266-7507nt 位置的重組可能以 China-2017 作為次要親本（圖 5A-C），并且跨越整個(gè)解旋酶區(qū)域（圖 4）。China-2017 毒株的重組發(fā)生于 1315-1878nt，以 KV-2001 為主要親本，China1-2017 為次要親本，編碼前導(dǎo)多肽氨基酸序列（LP）（圖 4 和圖 5D-F）。另外，KV-2001 重組發(fā)生于 7500-8908nt，以 China2-2018 毒株作為次要親本（圖 4B 和表 2）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中蜂囊狀幼蟲病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP2的密碼子優(yōu)化表達(dá)及其免疫原性研究[J]. 李芳兵,費(fèi)東亮,張皓淳,胡影,魏東,張鶴,岳金金,馬鳴瀟,曲祖乙.  病毒學(xué)報(bào). 2017(02)
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本文編號(hào)：2915055