發(fā)布時間：2020-12-09 12:54

　　目的:構(gòu)建分泌性表達白細胞介素（IL）-35真核載體pZM03（pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM）-重組卡介苗（BCG）。方法:在化學合成的IL-35基因片段中插入pBudCE4.1/GLS/OriM,將合成后序列插入到IL-12真核共表達載體pBudCE4.1/GLS/IL12/OriM的質(zhì)粒酶切回收產(chǎn)物pBudCE4.1/GLS/OriM中,構(gòu)建表達IL-35的穿梭/共表達質(zhì)粒重組質(zhì)粒pZM03（pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM）,再以重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化到BCG,構(gòu)建表達IL-35和BCG的重組pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM-BCG。結(jié)果:重組質(zhì)粒pZM03（pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM）經(jīng)PCR擴增、測序鑒定,以及在CHO 293T細胞中表達產(chǎn)物的Western blotting檢測,從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平對目標基因產(chǎn)物進行檢測驗證,pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM-BCG在細胞水平經(jīng)抗酸染色驗證,證實基因IL-35正確插入載體pBudCE4.1/GLS/OriM中,且pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學院學報. 2020年07期 第849-853+858頁

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
        1.1.1 主要試劑
        1.1.2 質(zhì)粒和宿主菌
    1.2 實驗方法
        1.2.1 IL-35序列的設(shè)計
        1.2.2 pZM03（pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM）質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.3 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM質(zhì)粒在CHO293T細胞中的表達驗證
        1.2.4 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM重組BCG的構(gòu)建
2 結(jié)果
    2.1 pBudCE4.1/GLS/IL12/OriM質(zhì)粒酶切電泳
    2.2 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM重組質(zhì)粒的菌落PCR鑒定
    2.3 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM重組質(zhì)粒在CHO293T細胞中表達產(chǎn)物的Western blotting檢測
    2.4 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM-MS重組菌的PCR鑒定
    2.5 pBudCE4.1/GLS/IL35/OriM-MS重組菌抗酸染色
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]新生期卡介苗和乙肝疫苗聯(lián)合接種對哮喘小鼠IFN-γ、IL-4和IL-17A表達的影響[J]. 沈雪艷,陳三妹,陳小萍,邢海燕,趙偉英,陳志華.  中國病理生理雜志. 2018(03)
[2]舌下特異性免疫治療過敏性鼻炎/過敏性哮喘患兒IL-17和IL-35水平的變化及臨床療效[J]. 丁蓮富,陳強,李嵐,劉建梅,章高平,朱曉華,吳愛民,柯江維,戴玉蘭,吳春雪.  中國當代兒科雜志. 2014(12)
[3]治療性疫苗的研究進展[J]. 聞玉梅.  中華微生物學和免疫學雜志. 1996(03)

博士論文
[1]IL-12+重組卡介苗新生期接種干預實驗性哮喘模型的作用及其機制研究[D]. 鄧昱.重慶醫(yī)科大學 2010
[2]柔嫩艾美耳球蟲rhomboid基因重組卡介苗的構(gòu)建及其免疫保護性研究[D]. 王秋悅.吉林大學 2009



本文編號：2906893